应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 从cDNA中无法扩增到很长的目的基因
61/1返回列表
查看: 1083  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

吕葱葱同学

新虫 (初入文坛)

[求助] 从cDNA中无法扩增到很长的目的基因

请问各位分子生物学的大神们，最近我做基因敲除需要回补几个很长的基因，一个基因的CDS有9000bp，另一个5000bp，从cDNA中一直扩不到目的条带，而且就算扩下来也担心在扩增过程中会有突变，导致整合上基因组后无法正确表达。有试过用自己的特异性引物从RNA反转录出特意的cDNA，然后以此为模板再一次扩增目的条带，目前看来也是失败。不知是否可以一小段一小段扩增，然后交给公司去拼接？请有经验的大神们帮忙提点建议，十分感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
好好学习
1楼 2017-11-24 17:13:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cosmos796

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
2楼2017-11-24 17:17:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吕葱葱同学

新虫 (初入文坛)
已经用特异性引物分段反转录，然后用高保真酶扩增出来片段，最后用重组酶进行重组构建质粒

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
好好学习
3楼2017-12-04 22:39:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

含笑少年。

新虫 (初入文坛)
就算是拆开扩，将近10k的片段不可能保证完全没有突变。。有序列的话找个公司做全基因合成吧。。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-12-06 13:53:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

含笑少年。

新虫 (初入文坛)
要不自己做的话费时费力。。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-12-06 13:54:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alissawang

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 吕葱葱同学 at 2017-12-04 22:39:38
已经用特异性引物分段反转录，然后用高保真酶扩增出来片段，最后用重组酶进行重组构建质粒

请问这种方法可以用来合成2kb的基因吗？重组酶贵吗？
赞一下 回复此楼
6楼2021-02-04 20:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 吕葱葱同学 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 8/400 2026-03-23 10:16 by 冠c哥
[考研] 284求调剂 +6 Zhao anqi 2026-03-22 6/300 2026-03-23 09:23 by king123！
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +5 ￣^￣゜汗 2026-03-19 7/350 2026-03-22 19:44 by 公瑾逍遥
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭