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从cDNA中无法扩增到很长的目的基因
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请问各位分子生物学的大神们，最近我做基因敲除需要回补几个很长的基因，一个基因的CDS有9000bp，另一个5000bp，从cDNA中一直扩不到目的条带，而且就算扩下来也担心在扩增过程中会有突变，导致整合上基因组后无法正确表达。有试过用自己的特异性引物从RNA反转录出特意的cDNA，然后以此为模板再一次扩增目的条带，目前看来也 是失败。不知是否可以一小段一小段扩增，然后交给公司去拼接？请有经验的大神们帮忙提点建议，十分感谢！  |
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