| 查看: 2489 | 回复: 13 | ||
alivingwtf捐助贵宾 (正式写手)
Nemo
|
[求助]
HPLC连续进样同一样品检测，峰面积增大 已有1人参与
|
|
各位朋友好，我用安捷伦1260液相分离一个多肽样品，但是我自己摸索的方法现在出现一个问题就是同一样品连续进样主峰的峰面积会慢慢增大，第一针峰面积16500，第二针就是16580，第三针16670，每次进样峰面积都增加50到100不等，无法做重复性实验了。 我用的流动相是A：95%水+5%ACN+0.1%TFA；流动相B：90%ACN+10%水+0.1%TFA，柱子用的是C18的柱子，我是从0min开始到30min用梯度洗脱，后面用流动相B冲洗10min，然后回到初始条件平衡10min，然后 开始走下一针样品； 出峰的时间没有太大变化，在0.02min时间内上下浮动； 我的样品是用10%ACN溶解的，进样器的托盘控制温度在4℃，应该不是溶剂挥发造成进样浓度增加导致峰面积变大； 一开始以为是柱温的问题呢，后来试过了20，30,40,50度这几个发现都一样，还是不断增大； 仪器没问题，因为前面用不同的方法走其他的样品的时候重复性是很好的； 我在这个条件的基础上增大梯度的陡度或者开始进样的时候增加一个等度平衡体系发现都没有什么用，峰面积依然逐渐增大； 我开始以为柱子的问题，然后换成C8的柱子，用这个方法走同样的样品依然是这样的情况； 请教一下有经验的朋友这是不是我的洗脱条件的问题，是否需要更换流动相或者说更换梯度的比例，如果是的话应该从哪儿来入手找到问题的所在，谢谢！ 如果发的版块不对的话请管理员提醒，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
材料学硕297已过四六级求调剂推荐
已经有9人回复
-
一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂
已经有5人回复
-
316求调剂
已经有4人回复
-
一志愿武汉理工材料工程专硕调剂
已经有8人回复
-
329求调剂
已经有8人回复
-
350求调剂
已经有4人回复
-
材料与化工 322求调剂
已经有3人回复
-
一志愿武理材料工程348求调剂
已经有4人回复
-
265求调剂
已经有13人回复
-
290求调剂
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- [HPLC常见问题]鬼峰、基线漂移、拖尾、分叉峰、保留时间漂移、柱压过高等系列问题
已经有54人回复
- 岛津液相色谱仪注意事项
已经有4人回复
xiao_meme
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 167.6
- 散金: 120
- 帖子: 90
- 在线: 12.4小时
- 虫号: 5466128
- 注册: 2017-01-10
- 专业: 色谱分析
2楼2017-11-22 19:27:45
alivingwtf
捐助贵宾 (正式写手)
Nemo
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3721.6
- 散金: 445
- 红花: 3
- 帖子: 614
- 在线: 134.8小时
- 虫号: 1193439
- 注册: 2011-01-20
- 性别: GG
- 专业: 文化学
3楼2017-11-22 20:13:12
刘超7162
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 10321.9
- 散金: 57
- 红花: 3
- 帖子: 1039
- 在线: 185.5小时
- 虫号: 621787
- 注册: 2008-10-10
- 性别: GG
- 专业: 药物化学
4楼2017-11-24 05:41:42
alivingwtf
捐助贵宾 (正式写手)
Nemo
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3721.6
- 散金: 445
- 红花: 3
- 帖子: 614
- 在线: 134.8小时
- 虫号: 1193439
- 注册: 2011-01-20
- 性别: GG
- 专业: 文化学
5楼2017-11-24 10:10:57
6楼2017-11-27 22:30:29
7楼2017-11-28 13:33:39
James_Xiang
铁虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 6.8
- 红花: 4
- 帖子: 174
- 在线: 31.9小时
- 虫号: 5238175
- 注册: 2016-11-15
- 性别: GG
- 专业: 分子影像与分子探针
8楼2017-11-28 16:40:24
alivingwtf
捐助贵宾 (正式写手)
Nemo
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3721.6
- 散金: 445
- 红花: 3
- 帖子: 614
- 在线: 134.8小时
- 虫号: 1193439
- 注册: 2011-01-20
- 性别: GG
- 专业: 文化学
9楼2017-11-29 12:59:49
alivingwtf
捐助贵宾 (正式写手)
Nemo
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3721.6
- 散金: 445
- 红花: 3
- 帖子: 614
- 在线: 134.8小时
- 虫号: 1193439
- 注册: 2011-01-20
- 性别: GG
- 专业: 文化学
10楼2017-11-29 13:00:36
10