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zhou-cuixia

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[交流] 寻求高效连接酶，求推荐已有6人参与

片段不算太大4500bp，载体，pwh1520，7900bp，求推荐高效连接酶。

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1楼 2017-11-20 23:11:10

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chenpp2006

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效率低的话，多挑几个克隆

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zhou-cuixia

2楼2017-11-21 02:49:29

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2楼: Originally posted by chenpp2006 at 2017-11-21 02:49:29
效率低的话，多挑几个克隆

谢谢，基本都是一个平板六个，都没有对的，

，有一个上万的，酶切后发现载体大小对，目的片段少了一千多，pcr验证也是竟然P出一个比目的条带一千多的

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3楼2017-11-21 07:26:11

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迷路人啊

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检查一下片段里面是不是有酶切位点我们一般用neb 的连接酶快而且效率挺高

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zhou-cuixia

4楼2017-11-21 11:05:53

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引用回帖:

4楼: Originally posted by 迷路人啊 at 2017-11-21 11:05:53
检查一下片段里面是不是有酶切位点我们一般用neb 的连接酶快而且效率挺高

谢谢，谢谢！！！

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5楼2017-11-21 15:00:40

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引用回帖:

2楼: Originally posted by chenpp2006 at 2017-11-21 02:49:29
效率低的话，多挑几个克隆

谢谢！

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6楼2017-11-21 15:01:14

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ksws0465326

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我们组常用TOYOBO的Ligation high, 效果挺好，如果有机会可以试试

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7楼2017-11-21 18:02:43

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和连接酶效率关系不大，片段大小影响也不大，关键是切的那步和连接比例的问题

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8楼2017-11-21 18:12:13

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我欲乘风归去

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建议做无缝克隆，推荐诺维赞的同源重组酶，价格也不贵。

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。

9楼2017-11-23 19:02:48

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houmaoqi

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T4 链接酶不行吗？

Tobeornottobe?

10楼2017-11-25 09:09:20

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