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danielle1725

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助:关于双酶切的问题!

大家好!我有个问题向大家求教
     最近我在做分子克隆方面的试验,就是要把目的基因连到目的载体上,可是我对目的基因双酶切的时候(目的基因在另外一个我不需要的载体上连着),发现跑出来的条带特别暗,我的目的基因大约300bp,无法胶回收,请问大家我该如何解决???谢谢各位了,我的qq:631298806
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

加大上样量就是了
而且,这个基因是自己扩出来的还是跟别人要的质粒需要自己切的
如果是自己扩的话,干脆PCR完后直接切,不需要连到载体上了
2楼2009-02-24 16:45:51
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

酶切体系中基因的量是多少?
可加大基因量
3楼2009-02-24 16:53:14
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danielle1725

新虫 (初入文坛)

酶切体系是20微升,加带目的基因的载体5微升
4楼2009-02-24 16:54:32
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danielle1725

新虫 (初入文坛)

如果我加大带目的基因载体的量的话,酶用不用多加
5楼2009-02-24 16:55:36
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

不要说什么多少微升之类的,没有意义
根据酶活的定义
1单位酶,1h内消化1ug DNA
酶切之前定下量看看
只要不超过就可以了
摇多点菌,提弄点质粒,然后切,切了之后跑肯定可以有条带的
6楼2009-02-24 16:56:47
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danielle1725

新虫 (初入文坛)

谢谢三磷酸腺苷,请问一下,能有你的联系方式吗?
7楼2009-02-24 17:02:10
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

同意楼上的,提的DNA可先测下浓度.
不过我们平时切的时候,第一次是100ul体系,第二次是50ul体系.胶回收把50ul体系全加上.第一次体系中基因一般是20ul,不行的话加40ul,我们做了很多,都能够回收到的
8楼2009-02-24 17:03:25
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danielle1725

新虫 (初入文坛)

这么大的体系呀,一个孔里点不完,是不是要分孔点样呢?
9楼2009-02-24 17:06:17
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

用透明胶把梳子黏成一个大孔……
山寨都这么做
10楼2009-02-24 17:07:43
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