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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 关于酵母单杂交自激活的问题
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fireermine

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于酵母单杂交自激活的问题 已有5人参与

大家好，麻烦咨询下我最近一直在做酵母单杂交，目的启动子序列1500bp，分成4段，分别连到PABAi载体上，结果都有自激活现象（AbA抗体1:1000也未抑制住），请问为什么这么容易出现自激活，各位在做的酵母单杂是否也这样，应如何解决，谢谢！
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1楼 2017-11-20 11:07:54
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金兰0703

新虫 (初入文坛)
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1楼: Originally posted by fireermine at 2017-11-20 11:07:54
大家好，麻烦咨询下我最近一直在做酵母单杂交，目的启动子序列1500bp，分成4段，分别连到PABAi载体上，结果都有自激活现象（AbA抗体1:1000也未抑制住），请问为什么这么容易出现自激活，各位在做的酵母单杂是否也这 ...

你好，你的问题解决了么

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2楼2018-08-24 13:13:01
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eroslh

新虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，你的问题解决了么，我也遇见了这个问题，并且我将pAbAi空载转入Y1H菌株中，在AbA1000ng时也没有抑制住
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3楼2018-10-16 11:30:20
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zhanghuaning

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by eroslh at 2018-10-16 11:30:20
你好，你的问题解决了么，我也遇见了这个问题，并且我将pAbAi空载转入Y1H菌株中，在AbA1000ng时也没有抑制住

AbA也有自激活作用吗？Aba不是比3AT好用吗。AbA也有假阳性吗？
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为了找一本风水的书才注册的
4楼2018-10-31 15:09:00
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王月APP

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by eroslh at 2018-10-16 11:30:20
你好，你的问题解决了么，我也遇见了这个问题，并且我将pAbAi空载转入Y1H菌株中，在AbA1000ng时也没有抑制住

我最近也出现这种问题，你的解决了吗？
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~~~~~~~~~~ing
5楼2018-12-05 18:40:01
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Zzz睡觉

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
启动子太长了，酵母中的转录因子可能也能和你的某段序列结合。这也和你启动子来源的物种有关，如果也是真菌，可能几十bp的启动子也能引起比较严重的自激活现象。如果想解决相关问题，可以先确定启动子的活性中心，先将你的启动子分成多段分别构到 pBI101.3-GUS上，通过观察GUS的活性确定启动子的活性中心，最好能小于200甚至100bp，一般这种长度自激活就不会那么严重了。可以参考下这篇文献DOI 10.1186/s12896-017-0344-7
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6楼2021-04-21 08:12:24
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