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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助]引物连接T载体，还需要设定酶切位点吗？
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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] [求助]引物连接T载体，还需要设定酶切位点吗？

我想请问，PCR产物可以直接连接T-载体，那还需要加入酶切位点吗？
T-载体上有酶切多克隆位点了！

如果我是下一步需要进行酶切验证，那是不是要插入“酶切位点”呢？
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1楼 2009-02-24 13:38:40
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
有一种T载体上带酶切位点,还有一种不带.
带酶切位点的T载体上若有你需要的酶,就可以不用加了,如果加上的话,可能会对后续连到表达载体上有一定影响,因为T载体上和基因上都有同样的酶切位点,连接效率不高.但也不是绝对的
还有一种是simpleT-vector,是将T载体改建的,它上面没有酶切位点,设计引物时需要加上位点,据说后面的连接效率比较高,我也正准备做这方面的,所以也不是非常肯定,呵呵!
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2楼2009-02-24 14:35:08
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