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dovekaoyan木虫 (正式写手)
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[求助]
从过滤膜上提取DNA 已有2人参与
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| 如题，我的目标水体中微生物含量很少，我用0.22um的膜过滤截留细菌，然后想从膜上提取基因组DNA，尝试了两种方法，一种是采用天根的土壤基因组DNA提取的试剂盒法，一种是CTAB手提。可是发现，前种方法一次只能用来处理很少量的膜，大约1/4块膜，可是我的膜上的生物量本来就不大，这样应用于提取的生物量更少，下一步实验DNA量不够；后一种手提法，虽说可以扩大提取体系，但是提取过程中可能因为膜被破坏的问题，掺杂了很多非核酸物质，DNA降解也很严重。不知道大家有什么好的方法没有？ |
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-11-24 07:57:38
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-11-24 07:57:38
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滤膜上的微生物没法刮下来是吧？那只能跟滤膜一起处理了，把滤膜当成植物叶片，液氮研磨或者匀浆碎，就用CTAB就行了，多处理一会，低速离心把杂质不溶物沉下去。然后酚氯仿抽提一下，想要量大一些就直接上清沉淀，也可以借用天根那个吸附柱，你上清加他家的上柱液挂柱，接着试剂盒后续操作就行了。一般这个微生物检测是做pcr吧，有一点出来就能做，讲不降解不是很重要 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-11-19 18:17:36
dovekaoyan
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
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- 虫号: 474576
- 注册: 2007-12-06
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
3楼2017-11-23 16:02:06
4楼2017-12-14 16:11:15
5楼2017-12-15 16:46:25
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7楼2018-10-30 14:33:14
8楼2018-11-02 07:14:00