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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 从过滤膜上提取DNA
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)

[求助] 从过滤膜上提取DNA 已有2人参与

如题，我的目标水体中微生物含量很少，我用0.22um的膜过滤截留细菌，然后想从膜上提取基因组DNA，尝试了两种方法，一种是采用天根的土壤基因组DNA提取的试剂盒法，一种是CTAB手提。可是发现，前种方法一次只能用来处理很少量的膜，大约1/4块膜，可是我的膜上的生物量本来就不大，这样应用于提取的生物量更少，下一步实验DNA量不够；后一种手提法，虽说可以扩大提取体系，但是提取过程中可能因为膜被破坏的问题，掺杂了很多非核酸物质，DNA降解也很严重。不知道大家有什么好的方法没有？
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1楼 2017-11-15 15:28:27
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酷莱博

新虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-11-24 07:57:38
滤膜上的微生物没法刮下来是吧？那只能跟滤膜一起处理了，把滤膜当成植物叶片，液氮研磨或者匀浆碎，就用CTAB就行了，多处理一会，低速离心把杂质不溶物沉下去。然后酚氯仿抽提一下，想要量大一些就直接上清沉淀，也可以借用天根那个吸附柱，你上清加他家的上柱液挂柱，接着试剂盒后续操作就行了。一般这个微生物检测是做pcr吧，有一点出来就能做，讲不降解不是很重要

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2楼2017-11-19 18:17:36
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酷莱博 at 2017-11-19 18:17:36
滤膜上的微生物没法刮下来是吧？那只能跟滤膜一起处理了，把滤膜当成植物叶片，液氮研磨或者匀浆碎，就用CTAB就行了，多处理一会，低速离心把杂质不溶物沉下去。然后酚氯仿抽提一下，想要量大一些就直接上清沉淀，也 ...

滤纸一起处理后发现最后出现很多白色胶状物，一开始以为是DNA，可检测发现没条带

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3楼2017-11-23 16:02:06
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lm880729

新虫 (初入文坛)
天津兰瑞 有一个微量提取试剂盒，号称4cfu/ml，都能提取。可以试一试。
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4楼2017-12-14 16:11:15
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小马科研部落

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
dovekaoyan: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-12-16 16:18:49
可以用CTAB的方法，前提是将滤膜上的微生物，用PBS洗下来，测PBS里面的。
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更多内容，请关注微信公众号【小马科研部落】，有问题可找QQ308091253
5楼2017-12-15 16:46:25
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梅西大哥梅东

新虫 (正式写手)
滤膜先用缓冲液震荡洗下来啊，再离心

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6楼2018-06-13 14:57:07
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柒橙0327

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以先用纤维素酶把滤膜溶解
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7楼2018-10-30 14:33:14
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Sniper153


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8楼2018-11-02 07:14:00
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