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贝柔儿

新虫 (初入文坛)

[交流] 如何找到需要的基因序列并扩全长?

需要找到老师所说的两个基因,并把其中的内含子也都扩出来,用怎样的方法比较合适?

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筱嘻嘻樱

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
知道基因的什么信息?基因名字或蛋白序列都可以去直接相关网站或NCBI上blast,找出基因组序列设计引物扩增。不知是不是你想问的问题。

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2楼2017-11-13 19:57:11
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yesucao

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
基因序列看多大,片段太长了扩增难度大。

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3楼2017-11-13 21:36:37
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贝柔儿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 筱嘻嘻樱 at 2017-11-13 19:57:11
知道基因的什么信息?基因名字或蛋白序列都可以去直接相关网站或NCBI上blast,找出基因组序列设计引物扩增。不知是不是你想问的问题。

谢谢谢谢,是的,现在进度是查到了基因的序列,也知道的包括的内含子,按照最后的目的,需要从起始密码子前面一段距离大概 大几百bp 处 为起始点 去 扩增,还需要把基因的内含子也都扩出来,不知道您有没有什么比较好的方法,是否可以赐教(≧?≦)/

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4楼2017-11-17 10:46:15
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贝柔儿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yesucao at 2017-11-13 21:36:37
基因序列看多大,片段太长了扩增难度大。

之前有师姐扩过,基因的内含子不太好扩出来,不知道您有没有什么建议呀(>﹏<先谢谢您了

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5楼2017-11-17 10:47:10
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筱嘻嘻樱

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 贝柔儿 at 2017-11-17 10:46:15
谢谢谢谢,是的,现在进度是查到了基因的序列,也知道的包括的内含子,按照最后的目的,需要从起始密码子前面一段距离大概 大几百bp 处 为起始点 去 扩增,还需要把基因的内含子也都扩出来,不知道您有没有什么比较 ...

就是启动子加基因组序列,直接选定要扩增的片段,设计引物,不能克隆出来吗?有没有测试一下引物的退火温度,换换酶呢?有时候基因扩增和不同的酶也有关系。

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6楼2017-11-17 10:57:11
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筱嘻嘻樱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 筱嘻嘻樱 at 2017-11-17 10:57:11
就是启动子加基因组序列,直接选定要扩增的片段,设计引物,不能克隆出来吗?有没有测试一下引物的退火温度,换换酶呢?有时候基因扩增和不同的酶也有关系。
...

如果只是扩不出内含子,模板用对了吗?

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7楼2017-11-17 10:58:04
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