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N050420225

铜虫 (小有名气)

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[交流] 请教：ECLIA基础问题，谢谢！

半年后毕业,导师硬性要求开展新课题电化学发光免疫分析(ECLIA),为了能顺利毕业,无奈,只能硬着头皮开始. 由于导师和自己都没有一点点基础,所以向各位大虾请教一些基本问题:

1)总结了一下基本操作步骤如下:

制备Ru(Bpy)32+标记的抗体___固定抗体于电极表面___抗体-抗原免疫反应___ECL检测, 加入底物,终止反应

不知这样的理解是否完整?其中是不是还有很多细节环节需要注意?

2) ECLIA中常用三联吡啶钌作为抗体标记物,文献中最常提到的是活化衍生物[Ru(bpy)3]2+＋N羟基琥珀酸胺酯（NHS）,查过,好像这种物质没有商品化成品,只能自己合成,该怎么合成,合成过程有没有什么特别需要注意的问题?

3) 文献中最常提到的夹心免疫分析法,先是将抗体固定到电极表面,然后形成抗体-抗原-标记抗体复合物,最后进行发光检测.其中
A-不同浓度的待测抗原是固定到系列电极表面,还是分次固定到一根电极上?
B-常提到加入发光底物以终止反应,是什么意思?

4) 所制备的固定好抗体-抗原-标记抗体复合物的电极能否更新?是打磨更新还是有什么更好的办法能使免疫传感器重生?

[ Last edited by hxj6021 on 2009-2-24 at 21:55 ]

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行动力！

1楼 2009-02-23 19:03:22

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sunblog2008

木虫 (正式写手)

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个人观点，仅供参考
1.理解错误。
2.衍生物[Ru(bpy)3]2+＋N羟基琥珀酸胺酯（NHS）合成这个需要半个月，体系要保持干燥。
3.a.都可以，b.就是未抗体和抗原结合停止，个人感觉他这么表述不对。
4.不能。打磨更新。