| 查看: 704 | 回复: 0 | |||
[交流]
请问做细菌功能基因组，3-5K的片段总是连不上载体是怎么回事呢？
|
|
选用的载体是pZ，用线性化引物扩出来之后切胶回收2k多的那条带，然后进行去磷酸化。 DNA方面我做了几组对照： （1）已知目的基因的pcr产物（大小900bp左右； r taq酶扩增，有加A尾） （2）已知目的基因的pcr产物（大小2.7kb左右； ex taq酶扩增，有加A尾） （3）已知目的基因的pcr产物（大小2.7kb左右； KOD酶扩增，不加尾，平端） （4）Covaris片段打碎仪打碎的片断（大小3-5K） （5）Sau3AI酶切产物（DNA基因组）（条带弥散，大多集中在3-5K） 将上述有加尾的DNA片段都经过END-IT末端修复酶处理（lucigen），纯化后所有5组DNA都与载体连接，用的是FAST-LINK连接酶（lucigen），连接产物纯化后扩插入片段。 结果：只有第一组的900bp左右产物能顺利连上；第二、三组在2k-3k区域有片段，但大小不对，电转后涂板挑菌摇菌提模板后扩插入片段，无条带，证明不是目的片段。 请问有大神可以帮我看下哪里出问题了吗？ 论坛新手，没有金币，抱歉了各位！  |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有213人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复