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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白质如何保藏？
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蓝色基因

金虫 (正式写手)

[交流] 蛋白质如何保藏？

利用超声破壁提取蛋白质之后，跑SDS-PAGE，UV-visible，酶活。初步告一段落。

请问一下，如果剩下的蛋白质一时不用，该如何保存呢，-70冷冻保藏？可以保藏多久呢？谢谢。
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1楼 2009-02-23 16:35:04
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
放-70是可以的，但具体时间我就不知道
因为一直都是用于做western的，只要不降解就好了
据说可以添加叠氮纳防腐，还有加蛋白酶抑制剂等防止降解
这个需要专人来解答了
不过我们实验室做蛋白表达的组，是会把它冻干成粉来保存的，这个会久一点，蛋白溶液毕竟容易出事
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2楼2009-02-23 17:16:48
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蓝色基因

金虫 (正式写手)
真空冷冻干燥冻成干粉保存，然后用的时候灭菌双蒸水稀释？。

谢谢楼上的回答。
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3楼2009-02-23 17:49:37
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
稀释最好用PBS吧，因为水的pH容易受到CO2的影响
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4楼2009-02-23 17:51:15
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蓝色基因

金虫 (正式写手)
再次感谢。

怎么赠送金币呢，找了半天找不到啊。
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5楼2009-02-23 18:03:11
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
==b
要在帖子发布的时候才能设置呢~~
等版主代劳咯
我在努力冲1500金……
突破了yc，现在变jc……
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6楼2009-02-23 18:08:23
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蓝色基因

金虫 (正式写手)
楼上的兄弟，在这板块经常看到你热心回答其他人的求助。

再次表示感谢，希望你早日达成目标啊！
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7楼2009-02-23 18:13:26
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
不客气
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8楼2009-02-23 18:23:19
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
中山大学的朋友好佩服 你才进来不到一年就有800多金币了 我很懒 就每天登一次才到现在

楼主是做生化测活 就是说是一个酶了？ 你如果已经拿出来用了那就放4度 （我不知你下个实验中间要等多久 你的蛋白稳定性怎样） 通常纯化完是分装的 尽可能少的每罐分装 -80保存 用一管拿一管 因为冻融损伤蛋白 尽量不要-70、80存了拿出来用了再放回去再拿出来
我的酶是链霉菌的 一般在自然界体内是体内最适30度 所以体外4度还稳定 有的4度可以放一个月仍有活性
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Bemühen Sie !
9楼2009-02-23 18:42:05
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
如果你要解结构 NMR可以冻干粉保存 晶体学最好浓缩到10mg/ml以上尽快筛条件
酶为了便于测活 就用溶液可以 叠氮化钠是防止长菌 巯基乙醇是保护蛋白不被氧化（不一定每个蛋白都需要 DTT代替也可以） 这两个东西是加到透析液里这样直接就在里面了 透析进去的 冻前一定要透析 10%甘油抗冻（也加在透析液里的）
做Western只要快速转到膜上就行了 千万不要保存胶 放一晚上肯定降解
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Bemühen Sie !
10楼2009-02-23 18:47:23
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