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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 周质蛋白含量很高，但SDS-PAGE电泳检测却没有目的蛋白？？？？
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 周质蛋白含量很高，但SDS-PAGE电泳检测却没有目的蛋白？？？？ 已有2人参与

我的实验是目的基因在周质蛋白的表达，用渗透压休克法得到了周质粗蛋白溶液，测粗蛋白280有较为明显的含量：

         对照组BL21空菌处理的周质蛋白含量0.08左右，各转化子蛋白在4-5mg/ml.----------------按说这个含量应该说明蛋白在周质表达很明显啦，但是问题来

了，电泳跑胶出来看不到目的条带，不知是什么原因，请大家帮忙分析分析！！！
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1楼 2017-11-11 11:19:40
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lao-nan-hai

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有目标蛋白，没分离出来；没我目标蛋白，没表达

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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让生命站立成树！
2楼2017-11-11 12:20:50
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lao-nan-hai at 2017-11-11 12:20:50
有目标蛋白，没分离出来；没我目标蛋白，没表达

什么意思，sorry!"有目标蛋白，没分离出来；没我目标蛋白，没表达
"
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3楼2017-11-12 02:57:34
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用蛋白含量标定是否表达，显然是不正确的，细菌生长过程蛋白含量也在飙升，做个阴性对照吧。SDS没跑出来就说明没表达
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4楼2017-11-13 09:01:00
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-11-13 09:01:00
你用蛋白含量标定是否表达，显然是不正确的，细菌生长过程蛋白含量也在飙升，做个阴性对照吧。SDS没跑出来就说明没表达

对照组BL21即为阴性对照可以说明问题吗？测得它的粗蛋白与样品差异明显；另外，有个阳性对照的样品是有目的条带的
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5楼2017-11-15 02:02:42
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
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5楼: Originally posted by charles08 at 2017-11-15 02:02:42
对照组BL21即为阴性对照可以说明问题吗？测得它的粗蛋白与样品差异明显；另外，有个阳性对照的样品是有目的条带的...

我觉得还是以page为准吧,蛋白含量这个很粗糙了,你想啊,微生物培养过程的阶段很难掌控的,不同阶段差一点点蛋白含量组分就差别很大的..
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6楼2017-11-15 11:55:07
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-11-15 11:55:07
我觉得还是以page为准吧,蛋白含量这个很粗糙了,你想啊,微生物培养过程的阶段很难掌控的,不同阶段差一点点蛋白含量组分就差别很大的.....

我现在在做浓缩纯化了，看看有无表达的情况
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7楼2017-11-19 07:14:37
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by charles08 at 2017-11-19 07:14:37
我现在在做浓缩纯化了，看看有无表达的情况...

其实你可以做下his标签的WB验证，简单直观
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8楼2017-11-20 08:47:05
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-11-20 08:47:05
其实你可以做下his标签的WB验证，简单直观...

纯化流程走完了，没有看到目的条带。但是阳性对照的条带还是有。。。。。。。。。
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9楼2017-11-28 05:52:29
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by charles08 at 2017-11-28 05:52:29
纯化流程走完了，没有看到目的条带。但是阳性对照的条带还是有。。。。。。。。。...

那就是没表达呗。。。诱导没？
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10楼2017-11-29 08:47:08
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