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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » T4连接
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13678921003

新虫 (初入文坛)

[交流] T4连接 已有3人参与

双酶切后，为啥总是连接不上，基本什么情况都考虑过了，也验证过了，可是挑菌落PCR还是没有目的条带，只有通用引物T7的条带，请问什么原因，谢连接一个多月了

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1楼 2017-11-09 20:20:07
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jxWire

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1.更换酶切位点
2.调整质粒与片段的浓度比，多尝试几种摩尔比1:1 1:3 1:10 等等
3.重新设计引物

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2楼2017-11-09 22:09:04
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王查查23

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
3楼2017-11-09 22:57:44
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13678921003

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jxWire at 2017-11-09 22:09:04
1.更换酶切位点
2.调整质粒与片段的浓度比，多尝试几种摩尔比1:1 1:3 1:10 等等
3.重新设计引物

摩尔比做了好几个梯度了，不过酶切位点和重新设计引物，我接纳了，谢谢你的建议，我继续干

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4楼2017-11-10 09:08:26
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13678921003

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王查查23 at 2017-11-09 22:57:44
你说的，基本情况包括哪些？

做了T-A克隆，验证了酶切是可以的，同时感受态细胞也验证没问题的，T4连接酶也可以在其他人做成功的

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5楼2017-11-10 09:10:32
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零时以南

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也一直连不上，今天还被老师说了

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6楼2018-01-21 21:33:30
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