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13678921003

新虫 (初入文坛)

[交流] T4连接 已有3人参与

双酶切后,为啥总是连接不上,基本什么情况都考虑过了,也验证过了,可是挑菌落PCR还是没有目的条带,只有通用引物T7的条带,请问什么原因,谢连接一个多月了

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jxWire

新虫 (初入文坛)


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1.更换酶切位点
2.调整质粒与片段的浓度比,多尝试几种摩尔比1:1 1:3 1:10 等等
3.重新设计引物

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2楼2017-11-09 22:09:04
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王查查23

禁虫 (小有名气)


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3楼2017-11-09 22:57:44
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13678921003

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jxWire at 2017-11-09 22:09:04
1.更换酶切位点
2.调整质粒与片段的浓度比,多尝试几种摩尔比1:1 1:3 1:10 等等
3.重新设计引物

摩尔比做了好几个梯度了,不过酶切位点和重新设计引物,我接纳了,谢谢你的建议,我继续干

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4楼2017-11-10 09:08:26
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13678921003

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 王查查23 at 2017-11-09 22:57:44
你说的,基本情况包括哪些?

做了T-A克隆,验证了酶切是可以的,同时感受态细胞也验证没问题的,T4连接酶也可以在其他人做成功的

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5楼2017-11-10 09:10:32
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零时以南

新虫 (小有名气)


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我也一直连不上,今天还被老师说了

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6楼2018-01-21 21:33:30
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