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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[交流] 【交流求助】有关PCR的相关问题

最近开始做PCR,以前很少涉及到这个,有很多地方不懂,希望懂的虫友能指点。
   1、首先我是用基因组DNA做模板来扩增其中的一小段DNA,那扩增完了之后,PCR产物两端的原基因组DNA是不是自动就断掉了呀?如果没断掉,我是不是应该在引物端带上酶切位点,然后再酶切多余的基因组DNA片段?
  2、环形的质粒DNA能用来做模板PCR吗?因为我现在需要四环素和潮霉素的基因,所以想用带有四环素和潮霉素的质粒来PCR扩增得到它们,不知道能不能行得通?
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holy518125

金虫 (小有名气)

第一个问题:PCR产物是在引物之间的扩增的结果,也就是得出的就是你的引物区域的基因片段,没有别的基因组的东西。
第二个问题:环形的是可以来扩增的,细菌好像都是环状的DNA,想问一下,四环素的基因还不知道吗?
2楼2009-02-22 18:37:17
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

1,不连到表达载体上的话,就不用加酶切位点.扩增后主要是你要的目的片段,也有一些长片段,但那是随着循环数线性增加,量很少,可以忽略不计。
2质粒能做模板

PCR扩增时,基因组和质粒DNA都需要先稀释,1/10,1/20或1/50都可以。量多了反而扩不出来。

以上仅供参考!
3楼2009-02-22 18:40:14
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

我发现PBR322上有四环素的基因,所以准备以PBR322为模板,设计引物来扩增四环素基因,有没有什么问题呀?最后要把扩增产物连接到载体上去,这个时候就是需要设计带酶切位点的引物吗?
4楼2009-02-23 17:41:39
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