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铜虫 (小有名气)

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[求助] 关于纳米球合成

最近在做纳米球，方法是参照一片文献上的“Two milliliters of 20% (w/v) PLG in dichloromethane (DCM) (Sigma, St. Louis, MO) was added dropwise to 4 mL of 1% (w/v) aqueous PEMA, and the mixture was sonicated for 30 s at 100% ampli- tude using a Cole-Parmer CPX130 Ultrasonic Processor equipped with a Cole-Parmer CV 18 ultrasonic probe adapter and a Cole-Parmer 3 mm probe with stepped tip. Immediately after sonication, the emulsion was poured into 200 mL of 0.5% (w/v) aqueous PEMA under stirring on a Bellstir Multistir 9 magnetic stirrer. The resultant nanoparticles were stirred for 12 h to allow for the DCM to completely evaporate and were then washed three times in 0.1 M sodium carbonate-sodium bicarbonate buffer, pH 9.6. The particles were then resuspended in a 20 mL solution of 3% (w/v) aqueous D-mannitol and 4% (w/v) aqueous sucrose, gradually frozen to 80 C, and lyophilized to dryness.”现在我遇到的问题如下：
1.测得粒径是890nm左右，测的时候我又超声了一分钟左右，还是差不多。理论得到的纳米球粒径是500nm左右
2.实验中，配制这个pema水溶液时，其实是不溶的，用超声后也还是悬浊液，但是我还是直接接下去做了，这会对粒径大小产生影响吗？是否应该滤去沉淀，但是我试了很久这个pema就是不易溶，如果滤去的话，与要求的浓度是不是就不一样了？
3.实验结束时，溶液呈现乳白色状，但是烧杯底部有一些不溶物沉淀，我的方法是用50微米的微孔滤膜先滤去了沉淀，然后才收集溶液开始洗，此时溶液呈现相对均一的乳白色状，细看会有肉眼可见的微粒，这样做，会对实验结果有影响吗？
4.洗颗粒时，我先11000r讲纳米球从溶液中沉淀出来，大约10min，可见离心管底部有疏松白色沉淀物，将其收集起来后，我用ph9.6的碳酸氢钠碳酸钠缓冲液清洗，再次11000r，10min离心后，发现几乎无沉淀！！！不知道是什么原因
5.因此，我最终使用纯水清洗，可收集纳米球，但是最终表征的时候，粒径太大了，但是比较均一，PdI大概在0.3左右，想知道清洗纳米颗粒时，用纯水和缓冲液的区别在哪？我现在使用了纯水是否会对纳米球造成影响
6.不知道有没有前辈能够指导下，是哪里比较容易出问题，另外，实验中超声时，我用的是普通的550w的超声清洗仪，超声时间有30s～100s都有，当时怕振幅不够，所以延长了时间，但是发现粒径还是很大。
7.最后附一张我的实验方案，以及粒径图（第一次测粒径，也不知道对不对）其中我将pema的用量增加了，是否也会对粒径造成影响？另外，测粒径时的浓度会对测量值有影响吗？我用的是0.25mg/ml，后来也有依次提高一些浓度，但是基本还是集中在1微米附近了！

图像 2017-11-1，11.14.jpg