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吉利画眉

铁虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 2549556
注册: 2013-07-17
专业: 植物营养学

[求助] GC-MS测定水稻叶片代谢物的前处理

各位虫友，大家好

  本人目前在提取测定水稻叶片的氨基酸、糖类等代谢物，是新手。经过查文献后，提取方法为提取液（甲醇：氯仿：去离子水 =  2.5：1：1）70℃水浴15min，用GC-MS检测不到东西或者只能检测到吡啶。现在将具体步骤列下来，请问是否哪些步骤有问题或有细节没有注意到。我自己在提取过程中遇到的疑惑附在最后，求解答，谢谢！

提取步骤：
  1 将植物鲜样用液氮研磨成粉末，称取0.1g粉末于2ml离心管中。
  2 向离心管中加入1.5ml提取液（甲醇：氯仿：去离子水 =  2.5：1：1）。
  3 向离心管中加入50μL的核糖醇（0.2g/L），按上盖子。
  4 离心管涡旋10s。
  5 离心管在70℃水浴15min。
  6 离心管在4℃下，12000g离心10min。
  7 取200μL的上清液于液谱瓶中，氮吹干。
  8 向液谱瓶中加入80μL的甲氧胺盐酸盐（20mg/ml，溶于吡啶），37℃恒温箱孵育2h。
  9 向液谱瓶中加入50μL的MSTFA，37℃恒温箱孵育2h。
  10 向液谱瓶中加入870μL的甲醇溶液，使得溶液体积达到1ml，气相质谱待测。

问题
  1  70℃水浴时离心管是否盖盖子，如果盖盖子的话水浴时会崩开，不盖的话溶液会挥发。
  2 在经过甲氧胺盐酸盐和MSTFA孵育后，液谱瓶中溶液只有130微升，是否需要加入甲醇使得溶液体积高一点（加甲醇这一步是小老师建议的，在文献中没有看到过）？

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