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叶老师讲分析系列------第一弹：HPLC分析方法建立概论
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现今，随着人们对药品安全问题的关注与日俱增，HPLC这一分离分析技术也得到了更加广阔的运用。 如何确定特定样品的最佳分离条件，只有通过实验才能得到。若从比较好的初始条件开始，往往可能在较短的时间内就得到满意的结果，做到事半功倍。反之，若随意实验，则只能事倍功半。 现今，人们对色谱分离技术已经有了非常深入的认识。一般的色谱工作者都知道随着实验条件的不同样品的分离会如何改变。对于大多数的HPLC方法建立，只要有足够多的实验数据，都能最终得到一个比较满意的结果。但是，对于时间就是金钱，项目进度必须保证的我们来说，基于色谱分离基础知识体系的良好的分析方法建立模式，能帮助我们更加高效，更加完美地解决工作中所碰到的色谱分离问题。良好的分析方法建立模式旨在于仅用几次必要的实验，即可得到理想的最终结果。即我们不希望做无用功，希望每一次的实验对最终的结果都有帮助。 通常，对于每一次的实验结果都需进行评价，然后根据评价的结果再往下进行。 HPLC方法建立的步骤：  在开始方法建立前，我们应该检查自己对样品的了解程度，明确分离的目的。 这里包括： 1. 所需分离组分内所含化合物的数目； 2. 各个化合物的化学结构（官能团）； 3. 化合物的分子量； 4. 各个化合物的pKa值； 5. 各个化合物的UV光谱图（VWD检测器是最常使用的检测器，UV光谱涉及到该样品在这个色谱条件下的吸收值） 6. 各个化合物在样品中的浓度范围，以及样品的溶解度。 上述物理化学性质能为选择色谱分离的最佳初始条件提供非常有价值的线索。 根据已知的样品信息，HPLC分析方法的建立目前有两种不甚相同的模式。一种模式称为“理论型，”是依据样品的“物理化学性质”选择最佳初始条件。而另一种模式称为“经验型”，则是直接开始色谱分离（做实验），而对样品的性质不大注意。初始条件一旦确定，后续则需要根据实验结果选择进一步的实验，直至得到比较理想的分析方法。 每周不定期更新，欢迎大家一起来探讨，也可以关注微信公众号，在公众号中交流经验  |
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