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Forest666

铜虫 (初入文坛)

[求助] 博来霉素(Zeocin)质粒提取浓度低 已有2人参与

在提取博莱霉素抗性质粒的时候浓度很低,质粒是pGAPZαA,宿主菌是E.coli DH5α,博来霉素工作浓度25μg/ml,试剂盒用的是天根的,试剂盒本身没什么问题,提其他抗性的质粒浓度能达到300ng/μl,就是提博来霉素抗性质粒的时候浓度低只有100ng/μl,5ml LB培养基培养过夜,菌液浓度是够的。请问有没有谁知道这是什么原因?大家有遇到过这样的问题吗?
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ATGC
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

这个是质粒拷贝数比较低吧,跟抗性基因关系不大。建议看看质粒的复制原点的性质。而且100ng/uL不算低了。
2楼2017-10-27 09:46:02
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jzpxs

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
Forest666(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励积极回帖 2019-02-21 09:08:17
需要使用LSLB培养基,就是氯化钠的使用量只有LB的一半。
3楼2019-02-20 23:47:48
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

100ng的不算低了,低的有二三十的。如果想抽提的高一些,可以更换其他丰富培养基
4楼2019-02-21 11:34:16
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阳光雨露118

新虫 (正式写手)

你好,你的问题解决了吗?我现在也遇到了同样的问题,能和我说说吗?

发自小木虫Android客户端
5楼2021-04-25 15:21:40
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abcjlm

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 阳光雨露118 at 2021-04-25 15:21:40
你好,你的问题解决了吗?我现在也遇到了同样的问题,能和我说说吗?

你如果做电转酵母的话,不用担心你提的浓度问题,如果你想提高抽提浓度,最好是换宿主
6楼2021-04-28 08:36:16
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