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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » TRIzol试剂提取DNA的纯度提高问题
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zsymike

新虫 (初入文坛)

[求助] TRIzol试剂提取DNA的纯度提高问题 已有1人参与

最近需要用TRIzol试剂来提取e.coli的RNA和DNA，经过几次尝试，RNA提出来的浓度和纯度都不错，但是DNA却差的离谱……最近几次的数据OD260/OD280竟然都不到1……UV的图谱也十分诡异，不像是DNA，我们是严格按照Protocol来走的，也尝试过改进一些步骤，但是都没有明显效果，求大神指点有没有办法提高DNA的纯度～
附全套protocol, 使用的试剂与protocol为配套同一公司的～

TRIzol试剂提取DNA的纯度提高问题


TRIzol试剂提取DNA的纯度提高问题-1


TRIzol试剂提取DNA的纯度提高问题-2


TRIzol试剂提取DNA的纯度提高问题-3


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1楼 2017-10-26 13:46:40
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酷莱博

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-10-29 08:43:44
还没研究过用trizol提DNA。好像又贵。又浪费时间。DNA提取跟RNA比简单多了。百度一个最简单的方法都行。什么SDS蛋白酶K，CTAB之类的都行。百度一下。买现成试剂也很便宜。trizol分相的时候，水相是RNA，有机箱含蛋白和DNA，这个纯化我就不太清楚了。难道要把pH值弄高一点，然后添水，DNAJ就到水相了。。。

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2楼2017-10-28 20:37:27
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北京，北京

禁言 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
3楼2018-01-03 07:53:26
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

trizol提取E.coli DNA不合适，DNA片段太大了，会和蛋白一起分布在中间层，你取上清，会丢失掉大部分。
直接用胍盐+去污剂（SDS、TX-100）的裂解液就可以提取了。
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核酸提取与Taqman诊断
4楼2018-01-04 15:19:10
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