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前行的璐

新虫 (小有名气)

[求助] pcr引物设计 已有1人参与

虫友们,大家好,现在要将一个质粒上的20bp替换成自己的目的片段(也是20bp),载体上的部分序列如下:
  5‘tctttgaaaagataatgtatgattatgctttcactcatatttatacagaaacttgatgttttctttcgagtatatacaaggtgattacatgtacgtttgaagtacaactctagattttgtagtgccctcttgggctagcggtaaaggtgcgcattttttcacaccctacaatgttctgttcaaaagattttggtcaaacgctgtagaagtgaaagttggtgcgcatgtttcggcgttcgaaacttctccgcagtgaaagataaatgatc
GAGTGCCCTAGTCGGTGTGAGAGTGCCCTAGTCGGTGTGAGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGGTGCTTTTTT      3’
GAGTGCCCTAGTCGGTGTGA  是我要替换掉的序列,通过pcr
我的目的片段是   GATACATGATGCGCAGTCCG
引物  F   5‘ GCAGTGAAAGATAAATGATC GATACATGATGCGCAGTC     3‘(载体上游序列20bp+目的片段18bp)
                    
         R    5’GCTATTTCTAGCTCTAAAACCGGACTGCGCATCATGTA        3’((目的片段18bp+载体下游序列20bp)       的反向互补序列     )
请问我这样设计可以吗?
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前行的璐

新虫 (小有名气)

重新写一下吧,不知道为什么成这样了
GAGTGCCCTAGTCGGTGTGA  是我要替换掉的序列,通过pcr
引物F  5‘ GCAGTGAAAGATAAATGATC GATACATGATGCGCAGTC     3‘(载体上游序列20bp+目的片段18bp)
     R   5‘’GCTATTTCTAGCTCTAAAACCGGACTGCGCATCATGTA    3’((目的片段18bp+载体下游序列20bp)的反向互补序列
请问我这样设计可以吗?
2楼2017-10-19 15:53:12
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日光海

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒上基因替换的话建议用试剂盒来做,那你可以参照这个试剂盒说明http://www.tiangen.com/asset/imsupload/up0031255001467248969.pdf
此外,其他公司也有很多这个功能的试剂盒
周老湿
3楼2017-10-19 16:43:06
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