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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 关于crispr载体的构建
汕头大学海洋科学接受调剂
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张锡晨

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于crispr载体的构建 已有1人参与

在构建crispr载体时， 20bp的选择要求序列后面有个PAM序列，即NGG。
而在设计sgRNA时，把ngg也加进去了，会有什么影响？
麻烦问下各位

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1楼 2017-10-16 16:41:11
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yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-10-18 07:42:58
感觉就相当于你的NGG成为了靶序列了。NGG后面还有NGG存在，那可能还能工作。如果不存在的话，估计就不能工作了。个人意见，未必正确。

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2楼2017-10-17 21:52:32
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liuxiaofei

铁虫 (小有名气)
没有影响，我刚开始也设计进去了，没事的

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3楼2017-11-17 14:58:29
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志者竟成

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuxiaofei at 2017-11-17 14:58:29
没有影响，我刚开始也设计进去了，没事的

Crispr构建载体，容易吗？

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4楼2018-03-01 13:07:03
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liuxiaofei

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 志者竟成 at 2018-03-01 13:07:03
Crispr构建载体，容易吗？
...

跟普通载体构建一样的，应该说比普通载体还好连接，因为片段短

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5楼2018-03-01 13:08:18
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志者竟成

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liuxiaofei at 2018-03-01 13:08:18
跟普通载体构建一样的，应该说比普通载体还好连接，因为片段短
...

单克隆多吗？

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6楼2018-03-01 13:11:10
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liuxiaofei

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 志者竟成 at 2018-03-01 13:11:10
单克隆多吗？
...

多啊

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7楼2018-03-01 13:12:05
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

基本不行，还是重做吧。
不过很多人有过这种rookie mistake，重做就是了，没什么大不了
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
8楼2018-03-02 05:37:05
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风逸1991

铁虫 (著名写手)
可能没影响

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但行好事莫问前程
9楼2020-07-25 19:24:05
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