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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我就想问下，有没有人和我一样
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cifer1230

金虫 (著名写手)

[交流] 我就想问下，有没有人和我一样

最近在做定量pcr,感觉整个人生都不美好了，首先我很郁闷，我们的定量pcr仪，比较少见，至少我是这么认为的，我们学校都好像没有第二个，基因公司的ECO
real-time pcr仪，它需要特定的板跟膜，48孔板，谁能想到这是一种巨巨巨小的板，每个孔装满最多30微升，注意是满了，每次加样都有问题，加样10微升，还要避光，我的眼睛要瞎，我稍有不慎那个液体就弹上来，加样每次都有小泡，离心30小时有时候都下不去（将其放入一个类似96孔板的托上），我想说只有我这么费劲吗？还有别人也用这个仪器吗？能否交流下，我真的快被逼疯了。
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1楼 2017-10-11 11:37:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

山还在那儿

银虫 (小有名气)
★
cifer1230(金币+1): 谢谢参与
机器确实奇葩！

避光没那么苛刻，加样时没必要！

一般96孔板2000rpm,2min气泡就除干净了！
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2楼2017-10-11 11:42:49
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cifer1230

金虫 (著名写手)
不在于避光苛刻，而在于孔太小，整个板身大概就是小拇指般长度呀！！！
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4楼2017-10-11 11:59:02
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didongwei

金虫 (著名写手)
★
cifer1230(金币+1): 谢谢参与
荧光定量没必要那么严格避光，别太强光就行，加样最好20微升体系，10微升太少，重复性差，离心不用那么久，只要管的底部没有气泡就可以，表面上的气泡，机器加热会自动消失，不影响实验

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9楼2017-10-13 22:31:10
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didongwei

金虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cifer1230 at 2017-10-14 09:05:49
我的那个板，加不了20微升，20微升看似都要满了...

一般不会的，你看一下孔的容量，384孔的板子是30微升的容量，加20微升感觉也要满了，就是孔底有气泡，所以加样的时候，枪头抵在孔壁上慢慢打出溶液就可以啦

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12楼2017-10-14 22:51:40
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普通回帖

cifer1230

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 山还在那儿 at 2017-10-11 11:42:49
机器确实奇葩！

避光没那么苛刻，加样时没必要！

一般96孔板2000rpm,2min气泡就除干净了！

我也觉得是，可是就是下不去，之前都有一个小时的时候，我现在加样很小心，尽量控制不出气泡了，就这样离心也得30分钟，那个板是架在那个托上面的所以我感觉不好离。
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3楼2017-10-11 11:56:30
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山还在那儿

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cifer1230 at 2017-10-11 11:59:02
不在于避光苛刻，而在于孔太小，整个板身大概就是小拇指般长度呀！！！

孔太小，离心气泡不好去，加样时多吸少打可以避免气泡，祝好！
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5楼2017-10-11 12:22:21
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cifer1230

金虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 山还在那儿 at 2017-10-11 12:22:21
孔太小，离心气泡不好去，加样时多吸少打可以避免气泡，祝好！...

嗯嗯，谢谢您
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6楼2017-10-11 14:49:14
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
★
cifer1230(金币+1): 谢谢参与
我以前用384孔板
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7楼2017-10-13 11:26:03
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cifer1230

金虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by didongwei at 2017-10-13 22:31:10
荧光定量没必要那么严格避光，别太强光就行，加样最好20微升体系，10微升太少，重复性差，离心不用那么久，只要管的底部没有气泡就可以，表面上的气泡，机器加热会自动消失，不影响实验
...

我的那个板，加不了20微升，20微升看似都要满了
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10楼2017-10-14 09:05:49
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cifer1230

金虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by didongwei at 2017-10-14 22:51:40
一般不会的，你看一下孔的容量，384孔的板子是30微升的容量，加20微升感觉也要满了，就是孔底有气泡，所以加样的时候，枪头抵在孔壁上慢慢打出溶液就可以啦
...

是啊，长知识了，下次试试，我把每次贴膜的时候真的都有感觉他都弹出来了，可气人呢，不知道是不是我自己的原因呢？哎
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14楼2017-10-15 18:19:23
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didongwei

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by cifer1230 at 2017-10-15 18:19:23
是啊，长知识了，下次试试，我把每次贴膜的时候真的都有感觉他都弹出来了，可气人呢，不知道是不是我自己的原因呢？哎...

没事，做久了有经验就好啦

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15楼2017-10-15 20:46:36
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筱嘻嘻樱

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
在做CFX的  384孔。。。避不避光跟仪器有关，现在好多都不需要避光了。

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16楼2017-11-13 11:07:19
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简单回复
cifer12308楼
2017-10-13 19:37   回复  
引用回帖:
7楼: Originally posted by junior850621 at 2017-10-13 11:26:03 我以前用384孔板

牛
nono200911楼
2017-10-14 09:45   回复  
cifer1230(金币+1): 谢谢参与
sz_kebaoyuan13楼
2017-10-15 17:09   回复  
cifer1230(金币+1): 谢谢参与
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