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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Taqman荧光定量PCR，样品重复间差异有点大
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李晴

新虫 (初入文坛)

[交流] Taqman荧光定量PCR，样品重复间差异有点大 已有3人参与

做96孔板，每个样品三个重复，重复间的差异有点大，比如一个CT值35，另一个CT值3.5。试剂盒用的是全式金的，现在有一批样品很稳定，做出来了，在做后一批时突然出现了重复间差异大的问题，请教各位大神给指点一下

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1楼 2017-10-10 16:05:50
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山还在那儿

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
35与3.5不是有点大，是大的离谱了！

理论上来说重复样本之间Ct值零点零几的差异都会造成结果的不小偏差！

你的问题可能是操作造成的！
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2楼2017-10-10 17:39:07
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李晴

新虫 (初入文坛)
但是我的操作真的没问题呀，跟以前的操作一样的，所以出现这样的结果我觉得真的很奇怪

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3楼2017-10-10 17:45:56
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tiger虎虎虎

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你做什么模板ct值在3.5？同一模板吗？
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向着阳光微笑
4楼2017-10-11 15:12:42
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李晴

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tiger虎虎虎 at 2017-10-11 15:12:42
你做什么模板ct值在3.5？同一模板吗？

同一模板

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5楼2017-10-12 17:24:40
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御风（远）

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-10-18 07:45:25
引用回帖:
3楼: Originally posted by 李晴 at 2017-10-10 17:45:56
但是我的操作真的没问题呀，跟以前的操作一样的，所以出现这样的结果我觉得真的很奇怪

你看下是不是前几个循环，本底线上翘严重，后面又有正常的扩增曲线，如果是，可能是反体不适合，或者探针质量不是很好，导致不稳定，出现有时扩增前面几个循环，本底线上扬
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6楼2017-10-13 13:27:51
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李晴

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 御风（远） at 2017-10-13 13:27:51
你看下是不是前几个循环，本底线上翘严重，后面又有正常的扩增曲线，如果是，可能是反体不适合，或者探针质量不是很好，导致不稳定，出现有时扩增前面几个循环，本底线上扬...

好的，谢谢

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7楼2017-10-17 17:13:28
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