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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 生物量的测定
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daidai0124

木虫 (正式写手)

[交流] 生物量的测定

由于本科是学食品的,现在课题搞微生物发酵,所以遇到很多难题,现在说出几点望大家指点一二,会有金币奖励!
    培养微生物时肯定要测生长曲线,本人OD值法和生物量法都试过,效果都不理想,重复性不好,特别是测OD值时,感觉老在变.现在想做一下发酵动力学模型,所以跟倾向与测生物量,但是我看了好多文献,感觉上面说的不靠谱,上面一般是取10~30ml发酵液然后离心,弃上清液,沉淀用蒸馏水洗一到两次(感觉这步多余),然后烘干至衡重!感人感觉这太不靠谱了,本来这东西量就少,取那么点发酵液能测量出来吗?严重怀疑.本人也做了一下,不过发酵液取的是100ml,然后按上面的方法做,发现也是测量不准,用分析天平称量时,数字不稳定.而且换算出来的两都很少换算成升也才零点几克.(我是用干燥前后离心杯只差直接算出生物量,也有将其离心后过滤,虑到滤纸上然后干燥,测量前后只差,算出来的)。
  各位测生长曲线或生物量有什么好方法啊,望各位不吝赐教!谢谢啦
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1楼 2009-02-18 10:15:44
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zhhl2981

木虫 (职业作家)
★ ★
daidai0124(金币+2,VIP+0):谢谢!分析天平测不准,是因为离心杯表面积太大,干燥后容易吸水,虽然分析天平里面有吸水的小球,但是其重量还是一直增加!考虑还是将其过滤到滤纸上在测量,不过个人感觉又多了一步,容易产生误差! 2-18 15:25
我不知道你发酵的是什么菌，一般菌发酵的话其生物量可以达到好几十克每升，也就是说你取样一百毫升的话，其生物量应该为几克。电子分析天平不稳，可能是你仪器问题或是你操作问题，我没看到，不好妄加评论。
作生长曲线：用生物量或OD值，BOTH ARE OK。其实OD值也是一种间接表示生物量的方法。
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2楼2009-02-18 15:00:24
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smallcat227

木虫 (著名写手)
生物量和OD值确实不太准，可以试试测核酸的，就是把菌悬液煮沸让核酸游离出来，测OD260
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3楼2009-02-18 15:25:30
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★ ★
daidai0124(金币+1,VIP+0):测核酸也是个间接的办法,我以后要拟合动力学,还是测生物量较好,100ml个人感觉是太高 2-18 15:30
daidai0124(金币+1,VIP+0):测核酸也是个间接的办法,我以后要拟合动力学,还是测生物量较好,100ml个人感觉是太高 2-18 15:30
引用回帖:
Originally posted by zhhl2981 at 2009-2-18 15:00:
我不知道你发酵的是什么菌，一般菌发酵的话其生物量可以达到好几十克每升，也就是说你取样一百毫升的话，其生物量应该为几克。电子分析天平不稳，可能是你仪器问题或是你操作问题，我没看到，不好妄加评论。
作生 ...

100ml几克的话有点高了吧……
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4楼2009-02-18 15:26:33
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sunhemei

★ ★
daidai0124(金币+2,VIP+0):谢谢!你如果是直接称量离心管为什么还要用蒸馏水洗两次?我看了好多文献也是说要洗两到三次,不明白为什么? 2-19 12:45
不知道你培养的是什么菌株，我们做的酵母测生物量就是用离心，一般是取45mL，用蒸馏水清洗两遍，放到60度烘箱烘24小时左右，因为离心管从烘箱里拿出来时有点热，所以要在室温下放置一段10min左右在测量，天平不会不稳定，一般生物量是1克多每100mL。还可以。你的量每L才零点几克是有点少，可能是你的培养方法有点不太合适，或者菌株本身就生物量不高。建议你认真设计一下培养条件。
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5楼2009-02-19 10:24:17
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qwj_1001

木虫 (著名写手)
这个问题很简单的。  
（1）菌种预培养：取斜面菌种1环至装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中，28℃、160r/min振荡培养24h。 （2）将上述培养好的菌液按照10%的比例接入另外15瓶装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中，并标号0-15，28℃、160r/min振荡培养，每隔2h取出一瓶培养液，并取出1mL菌液，4000r/min离心5min，弃去上清液，加入9mL蒸馏水使细胞重新悬浮，以蒸馏水为空白，620nm下比浊。以培养时间为横坐标，OD值为纵坐标，绘制生长曲线。
希望可以帮助你。一般来说，用空白培养基做对照即可。看你测多少小时来决定你的三角瓶个数

2.离心4000r/min离心10-15min，弃上清液。沉淀用蒸馏水洗一到两次（少量水）到平板中然后烘干至衡重。哈哈

[ Last edited by qwj_1001 on 2009-2-19 at 14:50 ]
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6楼2009-02-19 14:48:56
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qwj_1001

木虫 (著名写手)
★ ★
daidai0124(金币+2,VIP+0):谢谢,这个方法测OD的生长曲线不错,但是有个问题,种子液测生物量意义不大吧? 2-19 15:17
这是我用得方法，并且测定生物量比较准确
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7楼2009-02-19 14:56:19
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qwj_1001

木虫 (著名写手)
★ ★
daidai0124(金币+2,VIP+0):谢谢! 2-19 15:33
二级种子液，测才有意义，确定对数生长期
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8楼2009-02-19 15:24:17
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qwj_1001

木虫 (著名写手)
★ ★
daidai0124(金币+2,VIP+0):谢谢,我刚刚加你的QQ请求受到了没?还有些疑问一时半会说不清! 2-19 15:52
测发酵液的的生物量，取5-10毫升即可
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9楼2009-02-19 15:49:53
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daidai0124

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by qwj_1001 at 2009-2-19 14:48:
这个问题很简单的。  
（1）菌种预培养：取斜面菌种1环至装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中，28℃、160r/min振荡培养24h。 （2）将上述培养好的菌液按照10%的比例接入另外15瓶装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中 ...

疑问1:每隔2小时一个样是一个一个测,还是先把样取好放到冰箱里面,等取完样后一起测,因为我看到有文献是先取样,最后一起测的!
疑问2:取1ml后再离心,然后用水稀释,这个好像大多数是直接取1ml稀释十倍测量的OD值,不知道这两种方法区别大不,那个测量的更准?
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10楼2009-02-19 16:32:46
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