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xy656691金虫 (正式写手)
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[求助]
建立双抗体夹心法检测抗原，只能检测道重组蛋白，检测不到灭火病毒。什么原因？ 已有4人参与
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板子上包被单抗，1孔加灭活病毒，1孔加重组蛋白，另一孔用PBS作阴性对照。 37度反应30min之后，洗板5次，再加入酶标单抗（与包被的单抗不是同一株）进行检测。 结果：加入灭活病毒的孔与加PBS的孔OD值几乎一样，读值在0.4-0.5之间。加重组蛋白孔读值在3.4左右。 对这个结果很不理解，为什么检不出灭活病毒，却能检出重组蛋白？ 灭活病毒上应该同时存在针对两株单抗的结合位点，而重组蛋白上只有一个吧？ |
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2楼2017-09-26 18:12:35
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
xy656691: 金币+20, ★★★很有帮助 2017-09-27 14:17:59
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xy656691: 金币+20, ★★★很有帮助 2017-09-27 14:17:59
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首先你得确认你的两个单抗是否作用于重组蛋白的同一个位点，重组蛋白一般都是大分子能够提供很多抗原表位。 第二，如果你的两个单抗是作用重组蛋白的同一个位点，你得确定你的重组蛋白是否有重复的结构域，这个可以i通过查找文献查看是否有重复的氨基酸序列 第三，也就是的重组蛋白在灭活病毒的分布情况，是否是膜蛋白，两个单抗是否均作用于膜蛋白的胞外区域，灭活处理是否导致病毒蛋白的构型发生改变等 |
3楼2017-09-27 13:04:20
soarshining
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4楼2017-10-08 23:03:20
uan129
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5楼2017-12-20 09:31:04
feiyue122
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6楼2018-10-16 17:08:30