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xy656691

金虫 (正式写手)

[求助] 建立双抗体夹心法检测抗原,只能检测道重组蛋白,检测不到灭火病毒。什么原因? 已有4人参与

板子上包被单抗,1孔加灭活病毒,1孔加重组蛋白,另一孔用PBS作阴性对照。
37度反应30min之后,洗板5次,再加入酶标单抗(与包被的单抗不是同一株)进行检测。
结果:加入灭活病毒的孔与加PBS的孔OD值几乎一样,读值在0.4-0.5之间。加重组蛋白孔读值在3.4左右。

对这个结果很不理解,为什么检不出灭活病毒,却能检出重组蛋白?
灭活病毒上应该同时存在针对两株单抗的结合位点,而重组蛋白上只有一个吧?
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dzduy68

木虫 (著名写手)


观看中
2楼2017-09-26 18:12:35
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xy656691: 金币+20, ★★★很有帮助 2017-09-27 14:17:59
首先你得确认你的两个单抗是否作用于重组蛋白的同一个位点,重组蛋白一般都是大分子能够提供很多抗原表位。
第二,如果你的两个单抗是作用重组蛋白的同一个位点,你得确定你的重组蛋白是否有重复的结构域,这个可以i通过查找文献查看是否有重复的氨基酸序列
第三,也就是的重组蛋白在灭活病毒的分布情况,是否是膜蛋白,两个单抗是否均作用于膜蛋白的胞外区域,灭活处理是否导致病毒蛋白的构型发生改变等
3楼2017-09-27 13:04:20
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soarshining

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xy656691(youlinglyw代发): 金币+8, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2017-10-08 23:36:14
xy656691: 金币+10, ★★★很有帮助, 非常感谢 2017-10-14 16:42:37
主要还是抗体表位没有暴露出来,如楼上说的,很可能你的蛋白不是膜蛋白,或者两个抗体针对的表位不都暴露在病毒最外面。而且病毒的结构也有些复杂,有的有荚膜层,有的没有,可能不同灭活方式得到的病毒颗粒也不一样。
4楼2017-10-08 23:03:20
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uan129

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一句话 做免疫的要花大量时间和精力来筛选可以匹配的抗原抗体 找到能成功匹配的你就成功了一半了 不管那么多 就是试 看看别人做这个项目用的哪两株抗体 你买回来试一下 渠道可以查文献找 也可以找抗体供货商问
除了A片额从来不用日货
5楼2017-12-20 09:31:04
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feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

很可能是你的灭活病毒蛋白的抗原表位同你双抗体不配对
6楼2018-10-16 17:08:30
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