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[交流]
大师们赐教液相低压梯度的适应范围
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各位老师，本人想知道HPLC 低压梯度的适应范围，最好也把高压梯度也说一下，重谢呵呵 |
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chgli1981
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
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- 虫号: 564182
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- 专业: 兽医药理学与毒理学
2楼2009-02-16 13:18:36
3楼2009-02-16 18:35:30
回复楼主
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jsys(金币+3,VIP+0):感谢应助！ 2-17 10:38
jsys(金币+3,VIP+0):感谢应助！ 2-17 10:38
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高压梯度 利用两台高压泵将流动相的不同组分送入色谱柱的技术。 低压梯度 在常压下将流动相的各组分混合，然后用高压泵将混合流动相送入色谱柱的技术。 高压梯度相对低压梯度来说属于成本高，但是死体积小。 ①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。 ②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。 ③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。 ④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10～30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。 |
4楼2009-02-17 09:26:41