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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 想问一下这个电转感受的方法对么？
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maoxuequn

新虫 (小有名气)

[求助] 想问一下这个电转感受的方法对么？

AFP111（pKD46）电转感受态的制备：
①将转化有pKD46的AFP111菌株接种，30°培养过夜；
②第二天按1:100的比例转接到50ml LB中，加50ul 50mg/ml Amp，30°200rpm培养至OD600=0.25左右，加入1ML-阿拉伯糖至100mmol/L（5ml），诱导约至OD600=0.6，立即冰浴15min；
③4000rpm，4°离心10min，去上清，再用30ml 10%的甘油冲洗3次；
④浓缩500倍，用100ul的预冷的10%甘油悬浮，每管40ul，存放-70°保存。

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1楼 2017-09-21 07:30:59
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20081118129

新虫 (著名写手)

Drake
你好，你的这个感受态做成功了吗？谢谢！
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2楼2018-06-12 16:15:07
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maoxuequn

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 20081118129 at 2018-06-12 16:15:07
你好，你的这个感受态做成功了吗？谢谢！

成功了

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3楼2018-06-18 14:27:03
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20081118129

新虫 (著名写手)

Drake
引用回帖:
3楼: Originally posted by maoxuequn at 2018-06-18 14:27:03
成功了
...

感受态的放大就按照上面的吗？

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4楼2018-06-18 16:31:44
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maoxuequn

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 20081118129 at 2018-06-18 16:31:44
感受态的放大就按照上面的吗？
...

是的，你的同源臂多长？我最后找到原因是同源臂不够长。我最后用了500bp

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5楼2018-06-18 19:20:23
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dw5601

新虫 (小有名气)
请问，AFP111菌株从哪里能买到？

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6楼2020-10-09 06:01:45
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dw5601

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 20081118129 at 2018-06-12 16:15:07
你好，你的这个感受态做成功了吗？谢谢！

请问，AFP111菌株从哪里能买到？能否告知，谢谢

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7楼2020-10-09 06:02:34
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