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maoxuequn

新虫 (小有名气)

[求助] 想问一下这个电转感受的方法对么?

AFP111(pKD46)电转感受态的制备:
①将转化有pKD46的AFP111菌株接种,30°培养过夜;
②第二天按1:100的比例转接到50ml LB中,加50ul 50mg/ml Amp,30°200rpm培养至OD600=0.25左右,加入1ML-阿拉伯糖至100mmol/L(5ml),诱导约至OD600=0.6,立即冰浴15min;
③4000rpm,4°离心10min,去上清,再用30ml 10%的甘油冲洗3次;
④浓缩500倍,用100ul的预冷的10%甘油悬浮,每管40ul,存放-70°保存。

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20081118129

新虫 (著名写手)

Drake

你好,你的这个感受态做成功了吗?谢谢!
2楼2018-06-12 16:15:07
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maoxuequn

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 20081118129 at 2018-06-12 16:15:07
你好,你的这个感受态做成功了吗?谢谢!

成功了

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3楼2018-06-18 14:27:03
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20081118129

新虫 (著名写手)

Drake

引用回帖:
3楼: Originally posted by maoxuequn at 2018-06-18 14:27:03
成功了
...

感受态的放大就按照上面的吗?

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4楼2018-06-18 16:31:44
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maoxuequn

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 20081118129 at 2018-06-18 16:31:44
感受态的放大就按照上面的吗?
...

是的,你的同源臂多长?我最后找到原因是同源臂不够长。我最后用了500bp

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5楼2018-06-18 19:20:23
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dw5601

新虫 (小有名气)

请问,AFP111菌株从哪里能买到?

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6楼2020-10-09 06:01:45
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dw5601

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 20081118129 at 2018-06-12 16:15:07
你好,你的这个感受态做成功了吗?谢谢!

请问,AFP111菌株从哪里能买到?能否告知,谢谢

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7楼2020-10-09 06:02:34
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