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过阴离子柱时样品不能在Tris-HCl中溶清，但能溶于水已有1人参与
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我的样品是过了超滤的，小于1KDa的肽。我用pH为8的Tris-HCl作为平衡溶液过阴离子柱，上样时发现将0.4g样品溶于2ml Tris-Hcl无法溶清，超生和涡旋都试过还是无法溶清。于是我又稀释了一倍，再加了2ml Tris-Hcl。还是有白色沉淀。但是用4ml的纯水溶0.4g的样品就能溶清。过了0.45的滤膜后上样马上析出白色沉淀。求助大神们为何会出现这样的状况，有没有好的方法能继续纯化这个肽？ 发自小木虫IOS客户端 |
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2楼2017-09-19 16:09:35
walking dead
金虫 (小有名气)
填料制备和蛋白纯化专家
- 应助: 40 (小学生)
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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样品在缓冲液中的浓度应该在3mg~5mg/ml。你0.4g加4ml的缓冲液，你算下你的是多大浓度。400mg样品应该加100ml的缓冲液，超声搅拌后的可用真空过滤器过滤下，再上柱子。讲道理，你那么点溶液即使样品溶了，后面上样也会因为太浓，可能出现柱子堵塞，反压大，收率低等等的问题。祝你顺利。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-09-20 19:39:32