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大摇大摆

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于裂解细胞以使细胞破碎施放出待测物质的操作 已有2人参与

各位同仁,我想提取酵母菌细胞壁里面的麦角固醇,有个老师给我提的建议是清洗之后加少量无菌水,悬浮菌体,在培养箱里培养12h,这时菌死亡,释放出的溶菌酶能让细胞壁破碎,我想和各位讨论一下这可行吗?没做过对照 不清楚这种方法的效果

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我用双手成就你的梦想
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)


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这个方法效率太低了,直接用氯仿抽提好了,我以前用的是氯仿处理革兰氏阴性菌,处理时间不能太长,然后直接超高速离心去除菌体,上清再进行其他操作,有机抽提或者其他浓缩操作。

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2楼2017-09-19 18:36:12
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

也可以用差速离心法,不过我试过效果还不如这个方法好,但是我的目标某膜蛋白,可能跟你这个略有区别吧,不妨一试

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3楼2017-09-19 18:37:57
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)


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我用蛋白提取液重悬菌体,再加的少量氯仿,你可以用溶解醇的溶剂重悬,效果好不好,只能看实验结果

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4楼2017-09-19 18:39:53
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大摇大摆

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-09-19 18:39:53
我用蛋白提取液重悬菌体,再加的少量氯仿,你可以用溶解醇的溶剂重悬,效果好不好,只能看实验结果

哇,谢谢你的建议,我们这一步是往样品处理之前加了一步,在这之后还要用KOH的甲醇溶液进行甲酯化。你的这个方法我很感兴趣,不知道能不能加你的QQ谈一下呢?我的Q:469789413
我用双手成就你的梦想
5楼2017-09-19 21:12:08
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近水曲澜

新虫 (小有名气)


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引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-09-19 18:37:57
也可以用差速离心法,不过我试过效果还不如这个方法好,但是我的目标某膜蛋白,可能跟你这个略有区别吧,不妨一试

我要的也是蛋白质,请问有没有简单一点的方法,主要是用考马斯测它的蛋白质

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6楼2018-01-15 08:43:06
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