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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请问如果质粒上的某个酶切位点被甲基化了怎么办？
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

[交流] 请问如果质粒上的某个酶切位点被甲基化了怎么办？

请问如果质粒上的某个酶切位点被甲基化了怎么办？酶切切不动

有没有去掉这个位点甲基化的酶啊？
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1楼 2009-02-15 14:55:48
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
把质粒转化到甲基转移酶缺陷型的菌株（JM110似乎就是），提质粒，再切
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2楼2009-02-15 16:13:58
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
可是不知道为什么我从别人那里要了JM110后做转化可是总转化不成功，请问JM110转化有什么需要特别注意的吗？还有质粒的提取？
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3楼2009-02-15 22:07:29
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
guoqin_shiyin(金币+2,VIP+0):xiexie 2-16 11:34
跟别人直接要的感受态？可能运输的时候出了问题吧
重新划线，培养，然后再做成感受态
要不跟公司买好了~~
质粒提取？没什么悬念啊~~国产小抽试剂盒都能提得很好了，比如天根的对于高拷贝的质粒提取能力不错，况且你只是要做酶切
但是不推荐用国产试剂盒提低拷贝的……惨痛教训……
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4楼2009-02-15 23:28:45
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
不是跟别人要的感受态，是跟别人要的菌株，他常温下邮寄过来的，我划线了，培养后做感受态一个斑都没有。

请问JM110要培养几个小时能达到最佳做感受态的状态？
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5楼2009-02-16 11:36:09
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
guoqin_shiyin(金币+1,VIP+0):能够更详细点 2-16 14:31
不是很清楚，没有做过
问下NEB有没有相关的感受态
不过似乎只要dam－的就可以，忘记了
NEB的商品目录后面有列出一些菌株的基因型
还有关于酶切位点甲基化的注意事项
似乎sigma也有相关的缺陷型感受态
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6楼2009-02-16 12:46:14
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
NEB有啊，贼贵。。。。。。。。。。。。。dam–/dcm– E. coli 感受态细胞 dam–/dcm– Competent E. coli   

货号# 规格 价格 数量
#C2925H 0.05 ml/管 20 管  2,409.00 元 无
#C2925I 0.2 ml/管 6 管  1,869.00 元 无

请问别的公司有吗
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7楼2009-02-16 14:30:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
guoqin_shiyin(金币+2,VIP+0):谢谢你 2-18 12:22
呃，百度或者google一下……买国产的就好了，肯定有的

http://www.haigene.cn/competent_cell.html
随手就搜了一个
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8楼2009-02-16 18:29:20
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
有没有杭州的啊，我搜都搜不到。

刚刚那个是哈尔滨的，太远了，感受态邮寄过来怕会失活。
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9楼2009-02-18 12:27:51
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
=v=这个就不清楚了
不过杭州的话，问问上海生工有没有吧~~该挺近的
运输是用干冰，其实不会有太大的问题
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10楼2009-02-18 12:53:40
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