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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 10％SDS-PAGE分离胶配置后不凝固
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cancer prion

新虫 (初入文坛)

[求助] 10％SDS-PAGE分离胶配置后不凝固 已有1人参与

如题
今天配置20ml10％SDS-PAGE分离胶时多次失败，配置好之后不凝固。
配方如下（单位ml）
H2O   7.9
30％Acr-Bis  6.7
1.5M Tris-HCl（pH＝8.8）  5.0
10％SDS  0.2
10％APS  0.2
TEMED   0.008

APS已重配过，但依然无法凝固。SDS曾放入50℃恒温箱，TEMED一直放于4℃冰箱。

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1楼 2017-09-16 15:10:08
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肺肺是最棒的

新虫 (初入文坛)
最好买液体AP，粉末状容易变质

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2楼2017-09-16 15:13:16
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cancer prion

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肺肺是最棒的 at 2017-09-16 15:13:16
最好买液体AP，粉末状容易变质

APS已配成溶液，并且中午又重新配置过，但依然不凝固

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3楼2017-09-16 15:15:26
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药大C斌

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-16 22:43:02
sds重新配吧，我一般配不凝固，大多是ph8.8的tris hcl出了问题，可以去别的实验室借几毫升回来试试，看看怎么样。粉末的aps储存在4℃是没问题的。

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4楼2017-09-16 15:51:23
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Angle_Hebe

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-16 22:43:13
直接加ap粉末或者加大tmed的量在试一下，5min内不凝固，多半是缓冲液的问题了。

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5楼2017-09-16 16:20:56
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水逝雁南飞

新虫 (小有名气)
AP和TEMED是胶凝固的关键，可以考虑放在37度试试，那样会凝得快点

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6楼2017-09-17 15:47:06
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小宝是虫虫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
APS和TEMED是促凝剂，肯定和这俩有关，APS易失效，固体APS如果吸水就不可以使用了
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.
7楼2017-09-18 10:57:00
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药大C斌

新虫 (正式写手)
temed可以多加，20ml的胶，8ul太少了。楼主一般凝多久啊？我一般最少凝一个小时，没事会凝两三个小时

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8楼2019-04-22 22:40:39
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