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cancer prion

新虫 (初入文坛)

[求助] 10%SDS-PAGE分离胶配置后不凝固 已有1人参与

如题
今天配置20ml10%SDS-PAGE分离胶时多次失败,配置好之后不凝固。
配方如下(单位ml)
H2O   7.9
30%Acr-Bis  6.7
1.5M Tris-HCl(pH=8.8)  5.0
10%SDS  0.2
10%APS  0.2
TEMED   0.008

APS已重配过,但依然无法凝固。SDS曾放入50℃恒温箱,TEMED一直放于4℃冰箱。

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肺肺是最棒的

新虫 (初入文坛)

最好买液体AP,粉末状容易变质

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2楼2017-09-16 15:13:16
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cancer prion

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 肺肺是最棒的 at 2017-09-16 15:13:16
最好买液体AP,粉末状容易变质

APS已配成溶液,并且中午又重新配置过,但依然不凝固

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3楼2017-09-16 15:15:26
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药大C斌

新虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-16 22:43:02
sds重新配吧,我一般配不凝固,大多是ph8.8的tris hcl出了问题,可以去别的实验室借几毫升回来试试,看看怎么样。粉末的aps储存在4℃是没问题的。

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4楼2017-09-16 15:51:23
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Angle_Hebe

木虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-16 22:43:13
直接加ap粉末或者加大tmed的量在试一下,5min内不凝固,多半是缓冲液的问题了。

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5楼2017-09-16 16:20:56
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水逝雁南飞

新虫 (小有名气)

AP和TEMED是胶凝固的关键,可以考虑放在37度试试,那样会凝得快点

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6楼2017-09-17 15:47:06
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小宝是虫虫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
APS和TEMED是促凝剂,肯定和这俩有关,APS易失效,固体APS如果吸水就不可以使用了
.
7楼2017-09-18 10:57:00
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药大C斌

新虫 (正式写手)

temed可以多加,20ml的胶,8ul太少了。楼主一般凝多久啊?我一般最少凝一个小时,没事会凝两三个小时

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8楼2019-04-22 22:40:39
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