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歆予昕

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何用WB验证杂合子小鼠 已有1人参与

如题,客户需要验证一个杂合子小鼠的基因,使用WB 和qPCR,敲掉的是转铁蛋白受体(TFRC)蛋白,因为小鼠属于纯合致死,所以只能做杂合子。
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tiantian239

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
取小鼠尾部组织做 Genotyping
2楼2017-09-14 01:40:03
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歆予昕

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tiantian239 at 2017-09-14 01:40:03
取小鼠尾部组织做 Genotyping

是已经确定了的杂合子了,DNA的PCR已经做过了,问题是现在客户要求做RT-qPCR和WB,但是我觉得作为重要的转运蛋白,如果缺一半基因的话,另一半基因可能会代偿性的高表达。不会出现因为是杂合子所以蛋白表达减半的状况。
3楼2017-09-14 10:57:31
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cpu30qq

金虫 (小有名气)

只能取组织做一次看有没有下调了。

发自小木虫IOS客户端
4楼2017-10-17 00:27:22
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cpu30qq

金虫 (小有名气)

不过客户的要求感觉并不是很合理了,不过客户就是上帝嘛……

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-10-17 00:28:03
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崔景

铜虫 (小有名气)

做WB 定量很难吧,通过WB检测表达出来的蛋白与WT的蛋白完全严格定量,试试看吧。我做过RT-PCR 看到一条敲掉一条与WT一致

发自小木虫Android客户端
做最好的自己!
6楼2017-11-24 15:38:22
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