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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 如何用WB验证杂合子小鼠
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歆予昕

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何用WB验证杂合子小鼠 已有1人参与

如题，客户需要验证一个杂合子小鼠的基因，使用WB 和qPCR，敲掉的是转铁蛋白受体（TFRC）蛋白，因为小鼠属于纯合致死，所以只能做杂合子。
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1楼 2017-09-12 16:55:52
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tiantian239

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
取小鼠尾部组织做　Genotyping
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2楼2017-09-14 01:40:03
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歆予昕

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tiantian239 at 2017-09-14 01:40:03
取小鼠尾部组织做　Genotyping

是已经确定了的杂合子了，DNA的PCR已经做过了，问题是现在客户要求做RT-qPCR和WB，但是我觉得作为重要的转运蛋白，如果缺一半基因的话，另一半基因可能会代偿性的高表达。不会出现因为是杂合子所以蛋白表达减半的状况。
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3楼2017-09-14 10:57:31
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cpu30qq

金虫 (小有名气)
只能取组织做一次看有没有下调了。

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4楼2017-10-17 00:27:22
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cpu30qq

金虫 (小有名气)
不过客户的要求感觉并不是很合理了，不过客户就是上帝嘛……

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5楼2017-10-17 00:28:03
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崔景

铜虫 (小有名气)
做WB 定量很难吧，通过WB检测表达出来的蛋白与WT的蛋白完全严格定量，试试看吧。我做过RT-PCR 看到一条敲掉一条与WT一致

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做最好的自己！
6楼2017-11-24 15:38:22
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