镍柱纯化蛋白有杂带并且超滤时一加buffer就沉淀 - 分子生物 - 生物化学

zczczc26

禁虫 (初入文坛)

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1楼 2017-09-06 11:41:43

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030Selma

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250mM洗杂，这浓度也太高了。你确定是蛋白质沉淀而不是其他的东西？

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2楼2017-09-07 01:41:05

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alicelchf

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-08 07:44:38

ni column纯化都不会很干净，除非你多wash一下并且只取中间elution 部分，这样会稍微好一点
超滤沉淀可能是因为这个蛋白不稳定，我表达的有些蛋白1天就挂了。。。。没办法，就是纯化出来立刻马上做实验。
最后，你250mM太高了。。。。通常25mM wash，250甚至150 mM elute足够了

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修身、齐家、治国、平天下

3楼2017-09-08 02:29:56

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