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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 酶切
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2017mwl

新虫 (小有名气)

[交流] 酶切 已有5人参与

用Ecor1和Xho1两种酶酶切 takara公司的 37度酶切两个小时 质粒Ecor1位点还没切开完全 酶都是刚买的 咋回事啊 说明书一个小时都切开了

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1楼 2017-09-06 11:15:34
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lgd19891003

铁虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-07 07:42:21
检查下，看两种酶buffer活性100是不是一样，此外，一个小时切不完全正常，还有就是你的质粒浓度是不是太高，建议过夜切
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不懂就不懂，不能欺人，也不自欺
2楼2017-09-06 16:37:15
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2017mwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lgd19891003 at 2017-09-06 16:37:15
检查下，看两种酶buffer活性100是不是一样，此外，一个小时切不完全正常，还有就是你的质粒浓度是不是太高，建议过夜切

切10个小时没切彻底 质粒浓度90ng左右

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3楼2017-09-07 07:29:54
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前行的璐

新虫 (小有名气)
楼主，解决了吗
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4楼2017-09-07 16:27:22
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2017mwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 前行的璐 at 2017-09-07 16:27:22
楼主，解决了吗

解决了

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5楼2017-09-07 17:00:56
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1006641214

木虫 (正式写手)

wublab
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主是这么解决的能详细说说嘛最近我们也在做酶切，但是一直切不出来

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你好
6楼2017-09-07 17:16:58
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alicelchf

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-08 07:45:41
说明书都是perfect条件下perfect结果，所以还是实际经验比较重要，建议多切一会儿 保险
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修身、齐家、治国、平天下
7楼2017-09-08 02:22:12
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2017mwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 1006641214 at 2017-09-07 17:16:58
楼主是这么解决的能详细说说嘛最近我们也在做酶切，但是一直切不出来

首先我是按照说明书量加的 随后我减少了质粒的量切彻底了 切不彻底跟质粒浓度有关

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8楼2017-09-08 11:35:04
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2017mwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by alicelchf at 2017-09-08 02:22:12
说明书都是perfect条件下perfect结果，所以还是实际经验比较重要，建议多切一会儿 保险

说的对 就是按照说明书加的最大量程 切不彻底 降低了量切彻底了

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9楼2017-09-08 11:36:11
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前行的璐

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2017mwl at 2017-09-07 17:00:56
解决了
...

怎么解决的能详细说说吗？楼主
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10楼2017-09-08 21:44:57
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