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瞬时转染后 药物刺激的实验方案设计
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如题 本人的毕业课题是将一个目的基因在细胞中通过lip2000瞬时高表达 然后进行药物刺激 但是 不明白在将转染试剂6小时换掉之后 的操作 应该是怎么做的 比如说24小时观察转染效率之后再进行药物刺激 还是48小时观察后再进行药物刺激 进行药物刺激之前用不用进行血清饥饿 饥饿多长时间？药物最多能刺激多长时间后 处理细胞 提取RNA及蛋白 因为是瞬时转染的 所以药物刺激的时间必须在细胞高表达消失之前 有人说瞬时转染 高表达的时间是1到4天 这个时间是从把转染试剂6小时换掉之后就开始算的吗？拜托大家 帮忙解答一下这些疑惑 本人第一次接触细胞实验 望大家体谅 发自小木虫Android客户端 |
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正好上午组会讨论了一个师妹的实验，她也是跟你一样瞬转后加药，一般基因瞬转后24h表达量已经非常高，这个还取决于你用的细胞，所以对于这个问题你要再验证一下，这里所说的24小时是从你六小时换液之后开始算起，一般瞬转的蛋白表达确实在1-4天，之前我在一些实验中发现其实瞬转往往在24小时和48h区别并不是很大，而在72小时表达量会明显降低，这个需要你自己验证一下。另一个问题是加药之前需不需要饥饿，我们现在做的加药实验都不用饥饿，建议你先不用饥饿做一下，或者查一下别人在用你的细胞做加药实验需不需要饥饿，另外提醒你一点注意药的半衰期以及你加药后瞬转的时间不要太长最好不要超过72h 发自小木虫IOS客户端 |
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2楼2017-09-02 17:02:19
送红花一朵 |
谢谢解答 我实验方案是 将基因通过重组质粒 利用脂质体2000瞬时转染入正常细胞内 使基因高表达 再用药物刺激后 收集细胞 提取RNA和蛋白我不知道6小时转染后 基因什么时候可以高表达 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-09-03 15:13:41
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