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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白纯化后老是失活
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max小线

新虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白纯化后老是失活 已有3人参与

最近在做重组蛋白的纯化，用200w超声破碎细胞10min，经纯化柱纯化后测酶动力学，发现酶无活性，而且做了几次都没有活性，希望大神指点一下( ?? ??? )

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1楼 2017-08-29 09:48:05
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水逝雁南飞

新虫 (小有名气)
★
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是什么表达体系？原核表达还是真核表达？表达的是原核蛋白还是真核蛋白？

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2楼2017-08-29 15:51:22
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biotpack2

捐助贵宾 (小有名气)
★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-08-31 07:45:35
提纯的酶没有活性原因有很多的，例如蛋白序列有误，原核系统表达的蛋白不具有蛋白活性，蛋白活性本身不稳定或者在提取过程中失活都有可能造成蛋白活性丧失。一个一个去排除还是会比较麻烦，建议多查找文献，看看有没有别的实验室提纯过这个蛋白测定酶活以及用的什么表达体系。
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3楼2017-08-30 21:43:13
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梦想与理想

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
超声破碎有没有控制温度？这个酶对温度是不是敏感？原因很多，温度可能是一个方面。
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相信自己
4楼2017-09-01 10:35:40
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