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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 关于酶切和酶连
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sunmaocai

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助 关于酶切和酶连

载体靠的很近的两个酶切位点之间是否能插入目的基因，两个酶切位点大约相差10个bp
    请高手指导一下

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-19 at 12:39 ]
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1楼 2009-02-11 12:13:42
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★ ★ ★
sunmaocai(金币+3,VIP+0): s 2-11 13:29
应该没有问题
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2楼2009-02-11 13:13:19
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
sunmaocai(金币+4,VIP+0):ww 2-11 13:29
没问题，完全可以
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
3楼2009-02-11 13:28:25
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sunmaocai

铜虫 (小有名气)
我连了很多次都没连上，最近一次做过后pcr验证能跑出目的条带，但酶切验证却没有，为什么呀？求解答
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4楼2009-02-11 13:36:48
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):3Q~感谢讨论~ 2-11 14:42
菌落PCR能做出来就好。酶切验证有时候就是这样
不放心就挑一个克隆去测序
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5楼2009-02-11 14:37:25
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ningluztt

铜虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-11 21:36
做单酶切验证一下，另外pcr验证时要保证引物的特异性，否则即使扩出条带也不准确
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6楼2009-02-11 17:19:33
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zhhl2981

木虫 (职业作家)
问题不大
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7楼2009-02-11 19:45:23
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
引用回帖:
Originally posted by sunmaocai at 2009-2-11 13:36:
我连了很多次都没连上，最近一次做过后pcr验证能跑出目的条带，但酶切验证却没有，为什么呀？求解答

pcr跑出带不一定就证明已经连接上目的基因，但是，当你连接的量很小的时候，酶切之后，没有条带是正常的，建议你还是去把pcr产物去测序，或者做一个转化连接到t载体上。一般的说，只要是有酶切位点，都可以把目的基因连上，看看酶切位点是粘性末端还是平末端，选择连接酶
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会当凌绝顶，一览众山小
8楼2009-02-12 01:25:41
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qingxiong

木虫 (正式写手)
应该没什么问题,只要目的基因两端有这两个酶切位点
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9楼2009-02-12 14:44:36
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36678293

铜虫 (正式写手)
我可以帮你做，200快一个克隆，包测序！有兴趣联系QQ：36678293
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10楼2009-02-14 01:14:50
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