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锦瑟17

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白浓缩后跑胶几乎看不到条带但蛋白浓度还挺高 已有2人参与

我在跑完分子筛之后,分管跑了胶的时候目的蛋白的条带还很明显,用浓缩管浓缩后再跑胶就几乎看不到目的条带了,但是测蛋白浓度的时候还有将近20mg/ml的浓度,这是为什么?

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於怀龙

新虫 (小有名气)


2楼2017-08-25 23:48:30
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xiangcx

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是蛋白浓度太高析出沉淀了?
生活不止苟且和金钱,还有自然和远方。
3楼2017-08-26 15:30:56
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biotpack2

捐助贵宾 (小有名气)


有几个原因,首先可能你的蛋白容易降解,再就是选择的浓缩管孔径过大导致大部分蛋白在浓缩过程中损失了,再就是western检测的蛋白上样量少,还有可能是第二次的western的那一步骤有问题。
4楼2017-08-27 14:52:13
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
很明显,你浓缩的时候目的蛋白几乎损失殆尽。可能选择的膜孔径比你目的蛋白的分子量大。至于为什么蛋白浓度还有20mg/ml,那是浓缩后的杂蛋白。

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5楼2017-08-28 08:05:56
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