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21507024

新虫 (小有名气)

[交流] Rt-pcr结果不稳定怎么解 已有3人参与

如题,同样的样品(真菌的菌丝)提了好几次RNA做了好几次Rt-pcr,结果各不相同,这次的该基因是表达上调的,下次就成了下调,还有Ct值有时会大于30,到底是RNA的质量问题还是pcr的引物问题呢?求解。。。

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yumao8510

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是同样的样本量吗?每次提取效率差异不大吧

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2楼2017-08-28 10:26:31
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单向陀螺

新虫 (小有名气)

3楼2017-08-29 17:51:05
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balabala0801

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Rna不用反转成cDNA么?RNA不是会降解么

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4楼2017-09-04 16:00:27
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21507024

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yumao8510 at 2017-08-28 10:26:31
是同样的样本量吗?每次提取效率差异不大吧

样本量是一定的,研磨之前称好的,提取效率不同这个可能性很大

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5楼2017-09-04 16:05:39
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21507024

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 单向陀螺 at 2017-08-29 17:51:05
我也遇到这情况

后来怎么解决的呢

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6楼2017-09-04 16:06:07
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21507024

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by balabala0801 at 2017-09-04 16:00:27
Rna不用反转成cDNA么?RNA不是会降解么

是要反转录,之后用cDNA做模板来做rt-pcr,至于RNA降解这个是不可避免的,都会有降解

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7楼2017-09-04 16:08:40
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