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zhmy26

金虫 (正式写手)

[交流] 分子生物学迷茫之处

各位大虾,小弟有些问题咨询,望各位不吝赐教。
克隆基因的时候,因为成熟载体的多克隆位点前面已经设计的有启动子序列,所以引物设计为“保护性碱基+酶切位点+ATG...”,不需要克隆ATG上游的SD序列吗?
在下想同源重组失活某一基因,载体上面的序列怎样设计?就是设计成“同源基因上游片段+插入序列(抗生素标记)+同源基因下游片段”?那么上下游片段序列需要多长才合适呢?

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-2 at 13:43 ]
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


lwf991229(金币+1,VIP+0):3Q~感谢讨论~ 2-11 09:43
(1)有的序列是由载体提供的
(2)不同物种要求不一样
2楼2009-02-10 19:46:36
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zhmy26

金虫 (正式写手)

多谢楼上,不知能否更加详解?不胜感激。
3楼2009-02-11 08:52:06
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-11 10:28
如果是表达载体,在多克隆位点上游一般已含有蛋白表达所需的调控序列,如启动子,SD序列等
4楼2009-02-11 09:51:49
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zhmy26

金虫 (正式写手)

感激不尽。
5楼2009-02-11 10:25:50
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ningluztt

铜虫 (小有名气)

第一个问题:引物设计为“保护性碱基+酶切位点+ATG...”,不需要克隆ATG上游的SD序列
第二个问题:记得以前做基因敲除的时候上下游片段序列好像是在30-50bp,你可以查一些相关文献,记得文献上是有描述的
6楼2009-02-11 17:34:48
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zhmy26

金虫 (正式写手)

非常感谢。
7楼2009-02-12 09:32:13
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fyn512045

新虫 (初入文坛)

很感激啊!
8楼2009-05-09 01:28:35
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