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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 转接二级种子液培养1h后出现了悬浊沉淀
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落日余晖34

木虫 (正式写手)

[求助] 转接二级种子液培养1h后出现了悬浊沉淀

最近在做用crispr-cas9敲除克雷伯氏菌的一个基因，已经将cas9质粒转入菌株，打算用含有cas9质粒的菌株做电转感受态，转另外的质粒，但是我从KAN板上接到10ml LB摇瓶过夜培养后转接50ml LB做二级种子，培养了1h后出现了白色悬浊沉淀，培养温度为30度，转速为100rpm，我询问了师姐说是菌死了，我从冰箱 里面换了新的KAN之后还是出现白色悬浊沉淀，另外培养基也是新配的，做RED敲除的时候也遇到了这种情况，不知道各位吧友是否遇到过这种情况。

转接二级种子液培养1h后出现了悬浊沉淀
IMG_20170822_085428.jpg
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有时候总要努力下
1楼 2017-08-22 14:16:51
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yangmeng0711

新虫 (小有名气)
继续摇，有可能是菌体增多成团

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4楼2017-08-22 19:58:03
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yangmeng0711

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-23 23:03:12
不是所有的菌都跟大肠一样的，我做的链霉菌就是这样，跟它们的形体有关，可以加玻璃珠或者弹簧在摇瓶中

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7楼2017-08-23 07:57:16
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普通回帖

lijiawei2050

新虫 (小有名气)
为啥叫做“吧友”？

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2楼2017-08-22 14:36:59
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落日余晖34

木虫 (正式写手)
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2楼: Originally posted by lijiawei2050 at 2017-08-22 14:36:59
为啥叫做“吧友”？

虫友

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有时候总要努力下
3楼2017-08-22 14:58:12
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落日余晖34

木虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by yangmeng0711 at 2017-08-22 19:58:03
继续摇，有可能是菌体增多成团

后面继续摇确实会浓一些，但是这样会影响od的测定吧。菌体成团了

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有时候总要努力下
5楼2017-08-22 22:32:07
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落日余晖34

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yangmeng0711 at 2017-08-22 19:58:03
继续摇，有可能是菌体增多成团

还有那个菌体增多为什么会成团啊…

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有时候总要努力下
6楼2017-08-23 07:34:40
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落日余晖34

木虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by yangmeng0711 at 2017-08-23 07:57:16
不是所有的菌都跟大肠一样的，我做的链霉菌就是这样，跟它们的形体有关，可以加玻璃珠或者弹簧在摇瓶中

嗯，确实如此，但是出现这种情况的话会影响测od吧？因为做感受态要等菌长到一定od之后加入诱导剂进行诱导

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有时候总要努力下
8楼2017-08-23 08:23:33
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落日余晖34

木虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by yangmeng0711 at 2017-08-23 07:57:16
不是所有的菌都跟大肠一样的，我做的链霉菌就是这样，跟它们的形体有关，可以加玻璃珠或者弹簧在摇瓶中

一级种子是从板上接的，二级种子的话接种量为1%

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有时候总要努力下
9楼2017-08-23 09:24:35
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yangmeng0711

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-23 23:03:29
可不可以震荡测OD值，其实也可以根据摇的时间大致差不多的时候做感受态吧，无外乎感受态的活性高低而已

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10楼2017-08-23 19:22:53
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