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巴啦啦小仙女

新虫 (初入文坛)

[交流] pcr之后杂带去不掉 已有5人参与

下面条带为目标条带,但是pcr后总是会出现比目标条带大的条带(上面的),怎样也去除不掉。在不换引物的前提下,能否去除杂带

pcr之后杂带去不掉


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前行的璐

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引物的特异性,切胶回收目的条带可以吗?
3楼2017-08-18 14:54:30
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
提高退火温度,但你这个根本问题应该还是引物

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5楼2017-08-18 15:07:17
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gufeng2008

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
非特异条带量还蛮多的,引物去blast一下,看看是不是特异的,直接点就割胶纯化。
7楼2017-08-18 16:43:42
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18253592055

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
试着降低循环数,降低镁离子浓度,做一个退火温服的梯度pcr找个合适退火温度

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8楼2017-08-19 12:12:19
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巴啦啦小仙女

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 巴啦啦小仙女 at 2017-08-18 14:50:47
下面条带为目标条带,但是pcr后总是会出现比目标条带大的条带(上面的),怎样也去除不掉。在不换引物的前提下,能否去除杂带

...

引物为特异性引物

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2楼2017-08-18 14:51:18
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巴啦啦小仙女

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 前行的璐 at 2017-08-18 14:54:30
引物的特异性,切胶回收目的条带可以吗?

这个是聚丙烯酰胺电泳 只有回收才能解决了嘛

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4楼2017-08-18 14:58:47
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巴啦啦小仙女

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 上官abc at 2017-08-18 15:07:17
提高退火温度,但你这个根本问题应该还是引物

嗯嗯 引物的可能性比较大

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6楼2017-08-18 15:33:44
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巴啦啦小仙女

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by gufeng2008 at 2017-08-18 16:43:42
非特异条带量还蛮多的,引物去blast一下,看看是不是特异的,直接点就割胶纯化。

好哒

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9楼2017-08-20 08:06:25
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巴啦啦小仙女

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 18253592055 at 2017-08-19 12:12:19
试着降低循环数,降低镁离子浓度,做一个退火温服的梯度pcr找个合适退火温度

我想问因为我的杂带是上面那条 我可不可以把延伸时间改为0秒呢

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10楼2017-08-20 08:07:07
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