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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr之后杂带去不掉
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巴啦啦小仙女

新虫 (初入文坛)

[交流] pcr之后杂带去不掉 已有5人参与

下面条带为目标条带，但是pcr后总是会出现比目标条带大的条带（上面的），怎样也去除不掉。在不换引物的前提下，能否去除杂带

pcr之后杂带去不掉


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1楼 2017-08-18 14:50:47
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前行的璐

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物的特异性，切胶回收目的条带可以吗？
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3楼2017-08-18 14:54:30
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提高退火温度，但你这个根本问题应该还是引物

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5楼2017-08-18 15:07:17
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gufeng2008

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
非特异条带量还蛮多的，引物去blast一下，看看是不是特异的，直接点就割胶纯化。
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7楼2017-08-18 16:43:42
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18253592055

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
试着降低循环数，降低镁离子浓度，做一个退火温服的梯度pcr找个合适退火温度

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8楼2017-08-19 12:12:19
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普通回帖

巴啦啦小仙女

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 巴啦啦小仙女 at 2017-08-18 14:50:47
下面条带为目标条带，但是pcr后总是会出现比目标条带大的条带（上面的），怎样也去除不掉。在不换引物的前提下，能否去除杂带

...

引物为特异性引物

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2楼2017-08-18 14:51:18
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巴啦啦小仙女

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 前行的璐 at 2017-08-18 14:54:30
引物的特异性，切胶回收目的条带可以吗？

这个是聚丙烯酰胺电泳 只有回收才能解决了嘛

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4楼2017-08-18 14:58:47
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巴啦啦小仙女

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 上官abc at 2017-08-18 15:07:17
提高退火温度，但你这个根本问题应该还是引物

嗯嗯 引物的可能性比较大

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6楼2017-08-18 15:33:44
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巴啦啦小仙女

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gufeng2008 at 2017-08-18 16:43:42
非特异条带量还蛮多的，引物去blast一下，看看是不是特异的，直接点就割胶纯化。

好哒

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9楼2017-08-20 08:06:25
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巴啦啦小仙女

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 18253592055 at 2017-08-19 12:12:19
试着降低循环数，降低镁离子浓度，做一个退火温服的梯度pcr找个合适退火温度

我想问因为我的杂带是上面那条 我可不可以把延伸时间改为0秒呢

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10楼2017-08-20 08:07:07
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