24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2952  |  回复: 37

米夏girl

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助!对基因片段测序结果表示不解,求大神指导已有4人参与

我对炭疽属真菌的CHS(编号D)、TUB2(编号E)、CAL(编号F)三个基因片段分别进行了PCR扩增,并送公司测序。但是对测序结果表示很不理解,问题如图中标注: http://\"对基因片段测序结果表示不解,求大神指导\" http://\"对基因片段测序结果表示不解,求大神指导-1\"
问题说明
【1】图1中,样品D3、D5、D7、D11在胶图中显示为清晰的单一条带,但测序结果全部为“正向双峰”,请问造成这种结果的原因会有哪些?胶图显示为单一条带,但是测序结果为“正向双峰”,但是反向正常,这种现象是什么原因呢?
求助!对基因片段测序结果表示不解,求大神指导
【2】图2中样品E4、E2、E6、E10、E11在胶图中显示为清晰的单一条带,但测序结果全部为“反向双峰”,但正向是正常的。请问这是什么原因呢?
样品E9、E5、E7、E8条带清晰,但是结果为“双峰无条带,无法回收”,样品F2、F5也有清晰条带,测序结果为“信号弱\无信号”,请问造成上述结果的原因是什么呢?
求助!对基因片段测序结果表示不解,求大神指导-1
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bbass533

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
米夏girl: 金币+5, ★★★很有帮助 2017-08-15 15:48:29
本帖内容被屏蔽

8楼2017-08-15 15:41:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是克隆到载体测序的还是PCR产物直接测序的,克隆到载体上测序一般不会出现这种情况(通用引物测序),PCR产物测序如果正向重叠峰而反向正常,说明产物是单一的,问题在引物上,测序引物在产物上还有高匹配序列,你可以用正向引物与序列做一个比对,可能还有一个高匹配位点,尤其3'端。

祝你实验顺利
没有做不到,只有想不到!
10楼2017-08-15 16:04:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

salomemao

新虫 (小有名气)

个人感觉还是构建载体比较靠谱,比较片段最后还是要在载体上才能表达,转染等。

发自小木虫Android客户端
女人一定要有自己的事业
16楼2017-08-16 10:48:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbass533

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

17楼2017-08-16 10:51:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
米夏girl: 金币+5, ★★★很有帮助 2017-08-16 10:26:07
对的,这么短,只需要测一个方向就可以了,不需要测定双向,不过测序引物那一端有部分是测不出来的,如果不影响的话
没有做不到,只有想不到!
12楼2017-08-15 23:13:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 米夏girl at 2017-08-15 15:04:57
...

习惯就好,让你多测一次。也有可能他们加样没加好,或者用的是胶回收,然后没回收好。都有可能,建议下回用酶纯化法,不要用胶回收
13楼2017-08-16 08:41:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

小小小虫牙

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

2楼2017-08-14 20:46:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米夏girl

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小小虫牙 at 2017-08-14 20:46:26
有时候就会发生无论怎么搞都测不出来的结果

这咋整……再送一遍碰运气是么
3楼2017-08-14 21:27:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
现在的测序公司都爱这样,唉。就是让你多测几次,多收费呗。我也遇到很多次,明显不可能没有产物的嘛,结果显示浓度过低。要么就是测序无信号。习惯就好!
4楼2017-08-15 08:35:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

魔鬼的天使

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有没有可能是引物的问题?测序引物是不是不合适?或者测序引物降解之类的问题?
自控,自信
5楼2017-08-15 14:15:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米夏girl

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 魔鬼的天使 at 2017-08-15 14:15:45
有没有可能是引物的问题?测序引物是不是不合适?或者测序引物降解之类的问题?

我是个小白,不太懂哦~会不会存在引物在PCR扩增时好用,但是用到测序中就不好用了呢?所以我的结果一组样品全是反向双峰,一组样品全是正向双峰。
我的目的片段都是小于800bp 的,这样的情况下,我只拿到单向序列是不是就可以了呢?因为好多人说小于800bp的不需要测通。
请大神指教~
6楼2017-08-15 15:04:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米夏girl

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-15 08:35:35
现在的测序公司都爱这样,唉。就是让你多测几次,多收费呗。我也遇到很多次,明显不可能没有产物的嘛,结果显示浓度过低。要么就是测序无信号。习惯就好!

7楼2017-08-15 15:04:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米夏girl

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by bbass533 at 2017-08-15 15:41:44
现在测序一般一个反应就可以测到800bp,所以你可以选择单向测序,到时候自己比对峰图就好了。
出现双峰,有很多可能啊。比如说有一条杂带存在,但是浓度很低,咱们肉眼看不见,但测序的时候就显现出来了。也有可能 ...

我是个小白,不太懂哦~拿到的序列和峰图对比时,一般是要对比些什么呢?有哪些注意事项呀?
求大神指导~
9楼2017-08-15 15:50:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 米夏girl 的主题更新
信息提示
请填处理意见