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米夏girl

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[求助] 求助！对基因片段测序结果表示不解，求大神指导已有4人参与

我对炭疽属真菌的CHS（编号D）、TUB2（编号E）、CAL（编号F）三个基因片段分别进行了PCR扩增，并送公司测序。但是对测序结果表示很不理解，问题如图中标注： http://\"对基因片段测序结果表示不解，求大神指导\" http://\"对基因片段测序结果表示不解，求大神指导-1\"
问题说明
【1】图1中，样品D3、D5、D7、D11在胶图中显示为清晰的单一条带，但测序结果全部为“正向双峰”，请问造成这种结果的原因会有哪些？胶图显示为单一条带，但是测序结果为“正向双峰”，但是反向正常，这种现象是什么原因呢？

【2】图2中样品E4、E2、E6、E10、E11在胶图中显示为清晰的单一条带，但测序结果全部为“反向双峰”，但正向是正常的。请问这是什么原因呢？
样品E9、E5、E7、E8条带清晰，但是结果为“双峰无条带，无法回收”，样品F2、F5也有清晰条带，测序结果为“信号弱\无信号”，请问造成上述结果的原因是什么呢？

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1楼2017-08-14 20:40:51

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引用回帖:

10楼: Originally posted by 王平阳 at 2017-08-15 16:04:15
你是克隆到载体测序的还是PCR产物直接测序的，克隆到载体上测序一般不会出现这种情况（通用引物测序），PCR产物测序如果正向重叠峰而反向正常，说明产物是单一的，问题在引物上，测序引物在产物上还有高匹配序列，你 ...

我是直接送了PCR产物测序的，因为样品太多了，图省事，就出现了这么好多问题。我是一个小白，不太懂哦~您说的“你可以用正向引物与序列做一个比对”，这一步骤how to 实施呀？求赐教哦~
我的目的片段比较小，大概是300bp左右，如果正向双峰，是不是只用反向序列就可以了呢？