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Suph

银虫 (正式写手)

[求助] Western GAPDH出不来 已有1人参与

如题,我做320KD的蛋白,8%分离胶,200mA转膜3h,每次目的条带出的很好,但是GAPDH出不来,实在不知道什么原因,换过两次抗体,不过都是15年左右买的,请问各位虫友,以上情况,是抗体原因的可能性有多大?

另外,以上WB条件,40以下的marker分不开……

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Suph

银虫 (正式写手)

2楼2017-08-13 15:26:00
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Suph

银虫 (正式写手)

3楼2017-08-13 18:39:51
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香蕉芒果99

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
Suph(youlinglyw代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2017-08-14 11:57:41
4楼2017-08-13 20:36:26
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Suph

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 香蕉芒果99 at 2017-08-13 20:36:26
转过了吧

还真有可能,做出来过一次,GAPDH条带很细

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5楼2017-08-13 21:12:30
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香蕉芒果99

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
Suph(youlinglyw代发): 金币+5, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2017-08-14 11:58:23
引用回帖:
5楼: Originally posted by Suph at 2017-08-13 21:12:30
还真有可能,做出来过一次,GAPDH条带很细
...

蛋白大小差太多,你还是分开转膜吧。

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6楼2017-08-13 21:13:38
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chaosyw

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Suph(youlinglyw代发): 金币+10, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2017-08-14 11:58:06
担心抗体的话可以到下面两个链接中查下自己购买的抗体在sci中的引用情况,有些抗体就是不适合wb的
GAPDH抗体综述:
https://www.labome.com/review/ge ... enase-antibody.html
GAPDH全球产品列表:
https://www.labome.com/gene/huma ... enase-antibody.html
7楼2017-08-14 07:15:11
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Suph

银虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 香蕉芒果99 at 2017-08-13 21:13:38
蛋白大小差太多,你还是分开转膜吧。
...

好的,谢谢,我分开转看看

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8楼2017-08-14 08:02:30
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Suph

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by chaosyw at 2017-08-14 07:15:11
担心抗体的话可以到下面两个链接中查下自己购买的抗体在sci中的引用情况,有些抗体就是不适合wb的
GAPDH抗体综述:
https://www.labome.com/review/gene/human/glyceraldehyde-3-phosphate-dehydrogenase-antibod ...

谢谢……

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9楼2017-08-14 08:02:56
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biotpack2

捐助贵宾 (小有名气)


有两个原因,一是你说40kd一下蛋白分不开,GPADH就在40kd下面,因此很有可能也分不开,条带非常细不好看见;再就是像楼上所说的在转膜的过程中由于蛋白分子量太小被转出去了,蛋白量损失了,信号太弱所以看不到条带。建议换个分子量大一点的内参,或者目的蛋白和内参分开跑胶,转膜。
10楼2017-08-14 12:12:52
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