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月夜饮雪

新虫 (正式写手)

[交流] 烟草蛋白WB 已有2人参与

大神,小弟最近在做WB,我的基因末端添加his tag后导入到烟草中,已证明基因整合到烟草基因组中,但提取烟草总蛋白后,做WB,无信号。抗体是abcam的直标抗体。请问是怎么回事?

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lggy1321

新虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
换个强启动子重新转进去试试呢?可能是没有表达

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2楼2017-08-11 16:16:48
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
基因整个到里面了,蛋白表达了吗?表达量如何?wb杂对照或内参了吗,wb本身有没有问题?做事从头做,问题从头找,否则会很浪费时间。。

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3楼2017-08-11 23:14:49
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月夜饮雪

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lggy1321 at 2017-08-11 16:16:48
换个强启动子重新转进去试试呢?可能是没有表达

是强启动子

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4楼2017-08-12 17:21:48
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月夜饮雪

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 极北小白熊 at 2017-08-11 23:14:49
基因整个到里面了,蛋白表达了吗?表达量如何?wb杂对照或内参了吗,wb本身有没有问题?做事从头做,问题从头找,否则会很浪费时间。。

整合进去了,就是在验证有没有表达成蛋白的时候,出问题了。打算纯化一下his tag融合蛋白后在做一下WB

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5楼2017-08-12 17:23:11
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