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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 微生物、发酵 » L-乳酸
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hahahayixia

铁虫 (初入文坛)

[求助] L-乳酸 已有3人参与

有没有人测过L-乳酸含量？(最好不是高效液相色谱法)，有人用过单酶法测定吗
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1楼 2017-08-11 10:56:16
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在 Tris-Hcl-水合肼缓冲液中（pH＝9.2），利用乳酸在氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)存在的条件下,由乳酸脱氢酶(L-LDH)催化生成丙酮酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)。，利用 NADH 是一种强荧光物质,而 NAD+则无荧光的性质，通过测定 NADH 在 340nm 处吸光度的变化率，可得出酶促反应速度，并制得标准曲线，样品中的乳酸可由标准曲线求得。

步骤： 
1. 配制50ml的甘氨酸缓冲液：甘氨酸3.75g,硫酸肼2.6g.,E D T A•2 N a 0.1 g，加适量去离子水用10 mol/ L N aO H 溶液调整p H 至9.3,再加去离子水至50 ml 
2. 配制5ml2.1mol/l的硫酸铵溶液，吸取0.8ml置于乳酸脱氢酶中进行稀释 3. 称量NAD 0.01658g（663.4）溶于5ml蒸馏水瓶中（5mM），4℃保存至少可用 2周 
4.在pcr小管中加入100μl的甘氨酸缓冲液，100μlNAD+,20μl不同浓度的乳酸锂，2μl的乳酸脱氢酶溶液，置于37℃中反应1小时后，用石英比色皿在340nm处测定吸光度，以乳酸锂浓度为横坐标，A340为纵坐标绘制标准曲线 
4. 在pcr小管中加入100μl的甘氨酸缓冲液，100μlNAD+,20μl不同时间段的进行适当稀释的发酵液，2μl的乳酸脱氢酶溶液，置于37℃中反应1小时后，用石英比色皿在340nm处测定吸光度，利用标准曲线得出稀释后的发酵的乳酸根含量
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及时行乐，人生不留遗憾！
6楼2017-08-12 12:36:34
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普通回帖

hldj1964

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
L-乳酸最简单的酸碱滴定中和法。
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从事科研工作数载，现已退休，有一些经验可以奉献给年轻人，但电脑水平不佳，还需学习。
2楼2017-08-11 12:46:13
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hahahayixia

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hldj1964 at 2017-08-11 12:46:13
L-乳酸最简单的酸碱滴定中和法。

酸碱滴定不是测量普通乳酸含量吗
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3楼2017-08-11 19:44:44
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Only菱花

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2017-08-11 21:32:57
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落雪6

铁杆木虫 (正式写手)

小兵
不是有专门测乳酸的Elisa试剂盒吗？

发自小木虫Android客户端
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5楼2017-08-12 12:05:14
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测乳酸有现成的试剂盒可以买到，我用过南京建成的，自己配制还要单独去买酶和其他试剂，试剂盒也不贵
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7楼2017-08-12 23:20:25
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司寇秀雅
8楼2017-08-17 16:44:17
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wdtbc037
9楼2017-08-17 18:30:19
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司寇秀雅
10楼2017-08-17 22:24:57
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