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吴秋兰

新虫 (小有名气)

[交流] 基因克隆 已有2人参与

以链酶菌的基因组为模板P一段产酶基因（该片段GC含量较高），在pcr产物里面有相似的条带大小可以测序结果不是我的目的片段，这是什么情况

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1楼 2017-08-10 18:43:29
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
非特异嘛，检测一下引物，pcr使用高GC   BUFFER

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2楼2017-08-10 18:56:35
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mayunhui

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
目标片段大概有多长？
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书到用时方恨少
3楼2017-08-11 10:13:22
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吴秋兰

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 极北小白熊 at 2017-08-10 18:56:35
非特异嘛，检测一下引物，pcr使用高GC   BUFFER

试用过了高GC的缓冲液，用了高保真酶还是没测出来，您说的是要检测引物什么，有没有设计错么？还是什么

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4楼2017-08-11 12:49:10
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吴秋兰

新虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by mayunhui at 2017-08-11 10:13:22
目标片段大概有多长？

1500bp左右，并不是很长

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5楼2017-08-11 12:49:36
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by 吴秋兰 at 2017-08-11 12:49:10
试用过了高GC的缓冲液，用了高保真酶还是没测出来，您说的是要检测引物什么，有没有设计错么？还是什么
...

特异性呗，然后gc含量好的话退货温度肯定高一些，gc含量高就意味着可能重复序列多，

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

吴秋兰
6楼2017-08-11 13:05:24
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吴秋兰

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 极北小白熊 at 2017-08-11 13:05:24
特异性呗，然后gc含量好的话退货温度肯定高一些，gc含量高就意味着可能重复序列多，
...

怎么检测引物的特异性呢

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7楼2017-08-12 10:00:44
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 吴秋兰 at 2017-08-12 10:00:44
怎么检测引物的特异性呢
...

控制模板质量（浓度50ng，纯度好）的前提下，设计好的引物扩增（30循环），无杂带 条带清晰 无二聚体

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8楼2017-08-12 11:03:21
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吴秋兰

新虫 (小有名气)
可是我的目的片段gc含量比较高，设计的引物都不是很理想。这个怎么办呢

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9楼2017-08-12 11:23:39
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吴秋兰

新虫 (小有名气)
还有你说的模板浓度怎么检测的，我通常是直接加1微

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10楼2017-08-12 11:24:49
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