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苯酚硫酸法测多糖 已有1人参与
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求具体操作步骤，百科上都是湿样，我记得没这么麻烦啊，求干样的操作步骤，谢谢各位大神 发自小木虫Android客户端 |
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晋鹏
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【答案】应助回帖
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【实验原理】 植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖.苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下,脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物,在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且在485nm波长下有最大吸收峰,故可用比色法在此波长下测定.苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定,方法简单,灵敏度高,实验时基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色稳定160min以上. 【实验仪器及试剂】 1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量. 2．试剂： （1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR）,加蒸馏水10mL溶解,在室温下可保存数月. （2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液,加蒸馏水至30mL,现配现用. （3）浓硫酸（比重1.84）. （4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重,精确称取1.000g.加少量水溶解,移入100mL容量瓶中,加入0.5mL浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度. （5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中,加水定容. 【实验步骤】 1．标准曲线的制作： 取20mL刻度试管11支,从0－10分别编号,按表27－1加入溶液和水,然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液,摇匀,再从管液正面以 5－20s.加入5 mL浓硫酸,摇匀.比色液总体积为8 mL,在恒温下放置30min.显色.然后以空白为参比,在485nm波长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密度为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程. 2．可溶性糖的提取 取样品，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。 3．测定吸取0.5mL样品液于试管中（重复2次）,加蒸馏水1.5mL,同制作标准曲线的步骤,按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液,显色并测定光密度.由标准线性方程求出糖的量,按下式计算测试样品中糖含量. 式中：C一标准方程求得糖量（ug） α一吸取样品液体积（mL） V－提取液量（mL） n一稀释倍数 W一组织重量（g） 可溶性糖含量（％）＝从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀释倍数/[测定用样品液的体积(ml)×样品重量(g)×106]×100 |
2楼2017-08-07 19:22:39
3楼2017-08-12 17:13:51
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