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求助southern实验 已有1人参与
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亲们谁做过southern实验，我最近做了一个月了，但是一直杂不出条带来，郁闷，求大神指点，万分感谢 发自小木虫Android客户端 |
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首先非常感谢您在百忙中指点我，很感激，我想说我上了15ug基因组，我用的是罗氏的地高辛标记的试剂盒，一直杂不出来，阳性对照可以杂到条带，但是实验组杂不出来。酶切以后我也跑胶了基因组切开了呈弥散的条带，为什么总是杂不出来，求指点 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-08-05 22:49:33
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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1.可以增加上样量 2.一抗可以4°冰箱过夜，如果抗体效价不高可以增大一抗浓度或者延长一抗孵育时间 3.洗一抗时，不要过于激烈，可以TBST洗5次，每次5min 4.二抗浓度适当，室温孵育1h即可（确定二抗没问题，可以做个平行实验，或者实验室其他人用一下，看是否工作） 5.洗二抗同洗一抗 6.我一般是选择ELC显影，没用过碱性磷酸酶显色法，所以没有有用的意见提供~~ 封闭是用封闭液将PVDF膜没有结合蛋白的地方封闭上，减少背景，所以摇动要缓慢，提供充足的接触，也可以不要动，或者封闭过夜都可以。洗膜时摇动剧烈可能会将一抗洗掉，所以不要过于激烈。 祝实验顺利~~ |
2楼2017-08-05 22:02:04
